摘 要：目的：解读乙肝表面抗原(HBsAg)双试剂阳性而核酸检测呈阴性的报告，探究联合检测的意义。方法：选取2017年5月-2020年5月献血者标本内HBsAg血清学双试剂阳性的试样，均同时进行核酸检测，用原检测系统复测阴性标本。结果：共计采集22万份献血者检测标本。HBsAg血清学双试剂阳性标本92份，核酸阳性标本81份、阴性标本11份；其中核酸单检、混检阴性标本分别有4份、7份，对以上不同检测系统下的标本再行检查，至少有1次是阳性的标本分别有2份、5份。结论：不管是单检还是混检核酸系统，出现HBsAg血清学双试剂阳性，但核酸检测呈阴性的结果难以完全规避，应重视对核酸及血清学检测系统的测评，与实验室内原有检测法对比分析，规避漏检情况。
关键词：乙肝表面抗原 双试剂 核酸检测
乙肝是国内发病率较高的一种传染性疾病，对国民健康构成严重威胁，血液、母婴接触等是乙肝病毒(HBV)传统的主要媒介。HBs Ag是当前国内各级医院、采供血机构血液筛查时的一项常规指标，其在切断HBV经血液传播方面表现出良好效能，但因HBV存有窗口期感染与无应答持续感染，故很可能引起HBV的潜在性感染[1]。当下血清学检测结合核酸检测被越来越多的供采血机构使用，为进一步降低输血传播病毒的风险，本文探究了HBs Ag联合HBV-DNA检测这一新策略的应用情况，报告如下。
资料与方法
选取2017年5月-2020年5月献血者血液标本22万份，纳入本次研究的全部献血者均符合现行相关规范要求[2]。有92份标本HBs Ag血清学双试剂检测结果呈阳性。
试剂盒仪器：(1)仪器：EVO、FAME24/20、STAR、Procleix TIGRIS®System、UL-TRIO®Plus&ULTRIO®Elite;(2)试剂：核酸检测试剂为cobas®Taq Screen MPX2.0;PROCLEIX ULTRIX®Plus；用于血清学检测的试剂为HBs Ag。
操作方法：针对血清学双试剂检测结果呈阳性的标本，不管是利用混样还是单检模式均同步检测核酸含量。针对单检系统下核酸检测呈阴性的试样，采用原检测系统再行3次核酸检测；混检系统则采用原系统进行单次混检，若观测到混检结果呈阴性，则再行1次拆分单检。
结果
整体检测结果：HBs Ag血清学双试剂阳性标本92份，核酸HBV DNA阳性、阴性标本分别有81份、11份，依次占比为88.04%、11.96%；其中核酸单检、混检阴性标本分别有4份、7份，在阴性样本中所占比例分别为36.36%、73.64%。
血清学双试剂阳性、核酸检测阴性结果：核酸单检系统下阴性标本的血清学检测结果。见表1和表2。
表1 血清学双试剂阳性、核酸检测阴性结果
表2 核酸混检系统阴性标本HBs Ag检测结果
重复检测结果：针对第1次核酸检测结果呈阴性的试验进行重复再检测。
统计HBs Ag双试剂强阳性MPX2.0拆分阴性结果：本课题研究结果表明，共计有2份标本经血清学检查后呈强阳性，混检系统进行混检后结果表现为阳性，但拆分结果却显阴性。针对以上2份试样再行1次混检与拆分单检之外，还要于实验室内配置的单检核酸检测系统(ULTRIO®Plus&ULTRIO®Elite)上重复进行3次检测。
讨论
现如今，血液筛查检测策略方法对维持与巩固输血安全性方面起到的重大作用已经得到社会群体的普遍认可，最新版《血站技术操作规程》颁发以后[3]，新的检测策略实施阶段形成了新的检测理念，但是在实验室工作人员怎样把初有原始检测策略基于适宜的途径过渡至新的策略方法上，需要整体分析实验室既往形成的数据信息。在此基础上拟定相应的系统化比对方案，分析检测系统应用性能上存在的区别，在此基础上寻找到适宜度最高的检测系统组合形式。对本课题研究中统计的数据信息进行观察分析，在关于HBV的检测问题上，血清学与核酸检测系统两者能实现优势互补。但是若将抗-HBc筛查策略用于乙肝发病率较高的国家或地区，其适用性会显著降低，故而笔者认为应用HBs Ag联合HBV DNA检测策略是极为可行的。与此同时，在乙肝流行率较高的国家内HBV发生变异的风险明显提高，隐匿性感染的概率也相应上升，无形中给检测技术应用设置了诸多障碍点。虽然近些年检测技术有很大提升，医疗仪器先进性进一步增强，但实验室合理、高效率地应用这些检测技术手段，依然是实践中不断探究的共性课题之一[4]。
对表1和表2内的数据进行分析，第1次进行核算检测的阴性样本在HBs Ag双试剂阳性标本总量中占比11.96%。以上这些标本未进行最后的确认性实验研究，但结合前期发表的文献报道，其对应的阳性预期值达到了92.6%～99.2%，这就提示核算检测阶段滋生出了漏检的问题。该部分中S/CO>15的共计5个，占总数的45.45%，既往有研究发现S/CO确认阳性率和其自身数值大小之间存在正相关性[5]。血清学检测结果的S/CO最小值是1.07，这提示至少存在1种试剂的S/CO<5标本有3份。若依照新颁发的检测策略使用1次ELISA试剂进行检测，针对该部门标本是否能使100.0%检出需求得到保障需要后期工作中不断拓展研究的深度性[6]。对不同核酸检测系统没有检出的标本比重进行分析，单检、混检系统占比分别为36.36%、73.64%。而以上两个系统在试验时间范围中检测标准的总量大体统一。故而，若应用ELISA试剂联合混检系统的方法，应予以ELISA试剂灵敏度较高重视。对表2内统计的数据进行整体观察分析后，发现存在2个标本的核算混检结果呈阳性，但在对其进行拆分处理环节中，其对应的结果的确为阴性，2个标本的S/CO均>15，隶属于强阳性标本的范畴。观察以上这2个强阳性标本的检测结果，不难发现并不是只有当ELISA强阳性标本的核算混检系统呈阳性，拆分后一定是阳性，本文的重复检测结果表明这2份标本是低浓度试样，这在很大程度上对重复检测的检出率形成一定约束。综合分析这2份标本的检出结果，应考虑如下问题[7]：即便是ELISA强阳性标本，核酸检测时也难以完全规避漏检情况，此时若仅应用1次ELISA检测策略，那么就应加大对加样流程质量控制力度，基于合理的方法手段规避样本遗漏、添加的情况，这主要是由于若血清学检测阶段形成偏差，即便检测对象是强阳性标本，核酸检测依旧会出现漏检问题。
观察单检系统下形成的检测结果，虽然核酸重复检测时可能会检出低浓度标本，但实践中不能做到对全部标本逐一进行重复检测，这就预示着若用1次ELISA联合1次单检系统作为实验室检测的新策略方法时，在重视血清学检测阶段质控即灵敏度基础上，还需定时测评核酸检测系统的性能，进而实现对实验室最低检出限的精确、有效调控，借此方式提高对低浓度标本的检出率。观察混检系统下的检出结果，当其检出结果是阴性获得的标本，再行单检时，依然可能会检测出阳性结果[8]。
总之，不管是单检还是混检核酸系统，出现HBs Ag血清学双试剂阳性但核酸检测呈阴性的结果难以完全规避，应重视对核酸及血清学检测系统的测评，与实验室内初有检测法对比分析，规避漏检情况，进而使输血安全性得到更大保障，同时也能使我国医疗事业更健康、持续的发展，为维持人类健康提供更优质、安全的服务。
参考文献
[1]张毓,孙国栋,田丰,等.血站核酸实验室混样检测系统HBV DNA单阳性率分析[J].医学动物防制,2020,36(10):930-933.
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[3]任本春,周晓真,卓孝福.TMA技术在献血者HBV-DNA检测中的应用[J].中国实验血液学杂志,2019,27(6):1998-2002.
[4]漆爱红.溶血、脂肪血及保存条件对HBV DNA、HIV RNA核酸检测的影响[J].中国实用医药,2019,14(33):197-198.
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[6]张毓,孙国栋,张丽,等.献血人群隐匿性乙型肝炎的血清学分布特征分析[J].临床输血与检验,2019,21(5):480-485.
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[8]裴宝芹,夏兵.核酸检测HBV-DNA在乙肝检测中的作用分析[J].中国冶金工业医学杂志,2019,36(1):109-110.