李拥军 李 娜 唐家英 张 玲 张 琪 石 娟 王丽娜
山东省淄博市中心医院输血科，山东淄博 255036
[摘要] 目的 研究微柱凝胶法、聚凝胺法、抗人球蛋白法、酶法在红细胞血型抗体检测中的应用，比较不同方法的优缺点。方法 对5 260例输血标本分别采用微柱凝胶抗人球蛋白法、聚凝胺法、抗人球蛋白法、酶法进行交叉配血试验，检测不规则抗体，统计并分析不同方法的阳性检出率和漏检抗体。结果 阳性检出率方面：微柱凝胶抗人球蛋白法为0.68%，聚凝胺法为0.63%、抗人球蛋白法为0.68%，酶法为0.29%；不规则抗体漏检方面：微柱凝胶抗人球蛋白法与抗人球蛋白法无漏检，酶法漏检抗-C（2例）、抗-N（3例）、抗-E（1例）、抗-M（7例）、抗-S（3例）、抗-Cw（2例）、抗-Lea（1例）、冷自身抗体（2例），聚凝胺法漏检抗-E（1例）、抗-Jka（2例）。结论 微柱凝胶抗人球蛋白法不规则抗体检出率最高、操作简单、干扰因素少，应作为临床首选使用。
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关键词 红细胞血型；安全输血；不规则抗体；实验研究
[中图分类号] R457 [文献标识码] A [文章编号] 1674-074２（２０１4）07（c）－０026-02
[作者简介] 李拥军（1965-），男，山东淄博人，本科，主管技师，主要从事临床输血工作。
不规则抗体是指不符合ABO血型系Landsteiner法则的血型抗体，包括ABO亚型抗体和非ABO血型系统的抗体，多数为免疫性抗体(IgG性质)。相关研究[1]显示，不规则抗体在正常人群的检出率为0.3％~2％，而正常情况下，不规则抗体不存在人的血液中，但输血、妊娠等因素可使同种异体红细胞受抗原刺激而在患者体内产生相应的不规则抗体[2]。对于存在不规则抗体的患者，临床输血过程中输入相应的抗原红细胞后，则很可能产生溶血反应。因此，输血前应积极进行不规则抗体的筛查，以避免发生溶血性输血反应，保证输血安全。根据介质的不同，临床主要有酶法、聚凝胺法、抗人球蛋白法及微柱凝胶抗人球蛋白法四种常用方法[3]，该研究分别采用这四种方法对该院2011年5月—2013年5月间5260例有过输血史或妊娠史的标本分别采用进行不规则抗体检测，统计并评价不同方法的检出率等优缺点，以供临床选用提供参考，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取在该院住院的5 260例有输血史、妊娠史的患者血液标本，其中有输血史者2 926例，妊娠史者1 931例，有妊娠史反复输血者403例；5 260例患者中，男3 258例，女2 002例；年龄11~71岁，平均年龄36.5岁；该实验方案经该院伦理委员会批准后实施，所有患者入选前均签署知情同意书。标本为乙二胺四乙酸 ( EDTA ) 抗凝全血。
1.2 仪器与试剂
抗体特异性鉴定谱细胞（批号：20115702）、抗人球蛋白试剂（批号：20110105）、聚凝胺试剂盒（批号：20071018）、1%木瓜酶（批号：20080202）为上海血液生物医药有限公司生产，微柱凝胶试剂卡（批号：20100812）为长春博迅生物技术有限责任公司产品，FYQ型免疫微柱孵育器、TD-3B血型血清血多用离心机均为长春博研科学仪器有限责任公司产品。PN126可调式加样器（5～50 μL）为上海科兴生物科技有限公司产品。
1.3 方法
4种方法同时进行，试验完成后，统计不同方法的操作时间、干扰因素，计算阳性检出率，分析不规则抗体筛查结果。
1.3.1 标本处理 用离心机以3 000转/min的速度将5 260份血液标本离心1 min，分离血浆和红细胞。
1.3.2 微柱凝胶法 微柱凝胶试剂卡的孔中加入50 μL筛选红细胞及50 μL受血者血浆，用离心机已900 r/min转速离心2 min，然后再以1 500 r/min离心3 min，观察结果。
1.3.3 凝聚胺法 在 3支试管中分别加入50 μL筛选红细胞、100 μL受血者血浆，加入0.7 mL低离子介质，混匀，室温静置1 min，加入2滴凝聚胺溶液，混匀，室温静置15 s，用离心机3 000 r/min离心18 s，倒掉上清液，使管底剩余0.1 mL液体。轻摇试管，观察到试管出现明显凝集后，滴入2滴重悬液，轻摇试管，观察结果。
1.3.4 抗人球蛋白法 在试管中分别加入受血者血浆100 μL，筛选红细胞50 μL，混匀，室温孵育1 min，以3 100 r/min离心15 s，混匀，置入37 ℃孵育箱中孵育30 min，以NS洗涤红细胞3次，然后滴入100 μL抗球蛋白试剂，3 400 r/min离心15 s，观察结果。 1.3.5 酶法 在 3支试管中分别加入受血者血浆100 μL，筛选红细胞50 μL，混匀，室温静置1 min，加1%木瓜蛋白酶溶液100 μL，混合，37 ℃孵育30 min，3 400 r/min离心15 s，观察结果。
1.4 判断标准
肉眼观察红细胞出现凝集即判断为阳性，若红细胞凝集消失，悬浮在溶液中即可判断为阴性。对阳性结果进行不规则抗体鉴定，鉴定结果比对谱细胞的抗原格局图。
1.5 统计方法
该实验数据采用SPSS17.0软件对数据进行分析处理，计数资料采用χ2检验。
2 结果
2.1 4种方法不规则抗体检出率对比
该组研究中，微柱凝胶法与抗人球蛋白法不规则抗体检出率最高为0.68%；凝聚胺法检出率率为0.63%，酶法检出率最低为0.29%，见表1。微柱凝胶法检测结果中，2926例有反复输血史者阳性18例，检出率为0.62%，1931例妊娠史者中阳性14例，检出率为0.73%，403例有妊娠史反复输血者阳性4例，检出率为1.00%，3组阳性率差异有统计学意义（P＜0.05）。
2.2 4种方法不规则抗体筛查结果对比
不规则抗体鉴定结果：微柱凝胶抗人球蛋白法与抗人球蛋白法无漏检抗体，酶法漏检抗-C（2例）、抗-N（3例）、抗-E（1例）、抗-M（7例）、抗-S（3例）、抗-Cw（2例）、抗-Lea（1例）、冷自身抗体（2例），聚凝胺法漏检抗-E（1例）、抗-Jka（2例），见表2。
2.3 4种方法综合比较
试验完成后，对四种不同方法的准确性、操作时间、干扰因素及应用范围进行统计分析（见表3），结果显示，只有微柱凝胶法、凝聚胺法适用于临床交叉配血，相比凝聚胺法，微柱凝胶法准确性高且干扰因素少，但操作时间也略长。
3 讨论
临床上将ABO血型系统以外的抗体称之为不规则抗体，其中大部分不具有研究意义，但其中有一小部分不规则抗体会引起溶血性输血反应、新生儿溶血病等输血不良反应，严重时可危机患者生命。因此，临床输血前进行不规则抗体筛查具有重要意义。
目前，临床常用检测技术有酶法、抗人球蛋白法、凝聚胺法及微柱凝胶抗人球蛋白法，四种方法各有优势和缺点。酶法适合于检测有重大临床意义的Rh系统抗体，但不能检出抗-M、N、S、s、Fya、Fyb等抗体，这是由于酶可以破坏红细胞膜上的MNSs、Duffy系统抗原，会造成这类抗体漏检。如该研究中，其他三种方法检测到抗体M、N，而酶法检测不到。另外，酶试剂本身活性易失效，难以保存，因此酶法不适于常规不规则抗体的筛查。抗人球蛋白试验是最可靠、最经典的血型不规则抗体检测方法，但试验过程复杂，操作繁琐，需要较长的等待时间，不适合于临床紧急输血或大量标本检测，因此很少应用于临床工作，而只作为对少数标本的确定检验。凝聚胺法是一种操作简单、灵敏度高的不规则抗体检测方法，其成本低廉，操作快捷，对血型抗体敏感性(除抗-K外)均超过抗人球蛋白法、酶法，是多数基层医院常用方法，但此法需手工操作，易受到人为因素干扰，影响试验结果的判读。尤其在温度低时，其灵敏度也会收到影响，如该组试验中凝聚胺法造成2例抗抗-JKa不规则抗体漏检，结果提示，此法可能对对抗-JKa敏感性低，这与马曙轩[5]等的报道相符。另外，肝素抗凝样本对试验结果造成干扰，这是由于肝素所携带的高价负离子与凝聚胺所携带的正电荷中和，减弱了红细胞之间的特异性反应。凝聚胺不能检出抗-K抗体，这是因为凝聚胺和Kell系统抗原都带正电荷[6]。该研究中，凝聚胺法漏检的3例为抗-E、抗-JKa，考虑可能是人为操作因素影响和结果判断误差，建议在凝聚胺试验中使用显微镜判读结果，以避免弱阳性标本。微柱凝胶抗人球蛋白法是近年来新兴的一种免疫学检测技术，结合了凝胶过滤技术和抗原抗体反应技术，利用凝胶颗粒的分子筛作用，实现对抗原抗体反应后的红细胞的筛查，无IgG结合的红细胞穿过凝胶到达底部，与IgG结合的红细胞则会被凝胶中的抗IgG拉住，红细胞被阻止在凝胶柱上层或中间[7]。微柱凝胶法的试剂成本较高，但与酶法、抗人球蛋白法及凝聚胺法相比，具有灵敏度更高，且操作简便易行，人为干扰因素少，试验结果易判度、易保存等优点，已成为临床首选方法。
对以上4种方法的优缺点进行分析可知：酶法漏检率高、结果难以保存，抗人球蛋白法操作繁琐、等待时间长。因此，这两种方法基本不用于不规则抗体的临床检测。微柱凝胶抗人球蛋白法和凝聚胺法作为临床常用方法，在灵敏度上没有显著差异，都能满足临床应用要求，但微柱凝胶抗人球蛋白法干扰因素少，易于标准化，结果易判断又能较长时间保存，能提高输血安全性，宜选为常规配血方法[8]，凝聚胺法操作快速、简便，适合急诊配血。因此，对于硬件条件好的医院可优先选用微柱凝胶抗人球蛋白法进行不规则抗体的检测，而对于基层医院或急诊患者时可选用快速准确、成本低廉的凝聚胺法。
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参考文献
[1] 何子毅，刘赴平，李伟其，等.受血者血型鉴定准确率及不规则抗体阳性率调查研究[J].实用医学杂志，2011，27(5):877-879.
[2] 曲翠娥，郑洪泽.微柱凝集和聚凝胺法检测不规则抗体的对照分析[J].中国实用医刊，2013，40(14):24-25.
[3] 许大巍.左江涛.输血前不规则抗体筛查方法的比较[J].中国药物与临床，2013，13(5):677-678.
[4] 中华人民共和国卫生部医政司. 全国临床检验操作规程[M].3版.南京:东南大学出版社，2006:59-63.
[5] 马曙轩，白丽霞，刘景汉，等.4种检测IgG红细胞抗体方法的比较[J].第三军医大学学报，2005，27(7):660-662.
[6] 张志哲.血型不规则抗体检测方法及临床应用[J].内科，2011，6(3):266-269.
[7] 龙华泉，陈世豪，张伟坚.凝聚胺法与微柱凝聚法检测不规则抗体的对比分析[J].检验医学与临床，2013，10(1):39-40.
[8] 闫有敏.凝聚胺法和微柱凝胶抗人球蛋白法在配血中的应用比较[J].实用医技杂志，2013，20(4):418-418.
（收稿日期：2014-04-23）