摘 要：目的：分析极重度少精子症冻融精子行卵泡浆内单精子注射(ICSI)的疗效。方法：2020年11—12月回顾105例极重度少精子症(精子数量<1×106/mL)夫妇和61例梗阻性无精子症(OA)夫妇行ICSI的临床资料。其中47例极重度少精子症行冻融精子ICSI,58例行射出新鲜精子ICSI,61例OA患者行睾丸活检冻融精子ICSI。比较三组临床疗效。结果：三组女方年龄、不孕年限、E值、内膜厚度、获卵数及移植胚胎数比较，差异无统计学意义(P>0.05)。三组正常受精率、卵裂率、优质胚胎率、临床妊娠率、异位妊娠率及流产率比较，差异无统计学意义(P>0.05)。结论：极重度少精子症冷冻后复苏精子行ICSI，是一种有效的治疗方法，可降低手术取精的概率，其冷冻复苏方法仍有待进一步改进。
关键词：极重度少精子症 精子冷冻 卵泡浆内单精子注射
男性因素在不孕不育中的比重逐年增加，目前约占30%～50%[1]。重度少精子症是一种难治性的男性疾病，也是导致男性不育的原因之一[2]。卵泡浆内单精子注射(ICSI)技术的出现使得严重精液异常的患者也有机会生育[3]，然而极重度的少精子症有时会出现新鲜精液中精子极少甚至找不到可用精子的情况，导致在取卵日需要通过外科手术取精或者采用供精进行受精[4]。睾丸精子冷冻技术在辅助生殖中已经得到一定应用，而由于精子冷冻技术的局限性，极重度少精子症的精子冷冻复苏后行ICSI的方法在临床上应用并不广泛[5]。分析极重度少精子症冷冻后复苏精子行ICSI的疗效和临床结局，现报告如下。
资料与方法
2020年11-12月回顾105例极重度少精子症(精子数量<1×106/m L)夫妇和61例梗阻性无精子症(OA)夫妇行ICSI的临床资料。
分组：取卵日新鲜精液中未找到可用精子，将冷冻精子复苏后行ICSI的47例，为极重度少精子症冻融精子组；取卵日新鲜精液中找到精子行ICSI的58例，为极重度少精子症新鲜精子组；梗阻性无精子症睾丸切开取精术(TESE)后冷冻精子复苏行ICSI的61例，为梗阻性无精子症冻融精子组。
极重度少精子症精子冷冻与复苏：(1)精子冷冻：禁欲3～5 d，手淫方式取精。镜检后若可以冷冻，将精液处理后投入液氮罐进行保存。如果精液镜检后达不到我中心冷冻要求(>5个HP偶见或未见精子)，则放弃冷冻。(2)复苏：将冻存管取出后立刻投入37℃水浴，约10 min，溶解后放入5 m L G-MOPS中，离心后去上清液留沉淀，置于显微镜下寻找精子。
观察指标：女方年龄、不孕年限、E值、内膜厚度、获卵数、移植胚胎数、正常受精率、卵裂率、优质胚胎率和临床妊娠率、异位妊娠率及流产率。
统计学方法：数据应用SPSS 26.0软件处理；组间均数的比较采用方差分析，组间两两比较采用LSD法；组间率的比较采用χ2检验或Fisher's确切概率法；P<0.05为差异有统计学意义。
结果
三组患者一般资料比较：三组女方年龄、不孕年限、E值、内膜厚度、获卵数及移植胚胎数比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。
表1 三组患者一般资料比较
三组患者ICSI结局比较：三组正常受精率、卵裂率、优质胚胎率和临床妊娠率、异位妊娠率及流产率比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。
表2 三组患者ICSI结局比较(%)
讨论
少弱精子症及无精子症等精液异常在不育患者中占近60%～75%[6]，其中重度少精子症是一种难治性的疾病，药物治疗效果不佳。ICSI对于这类患者是一种相对有效的手段，有研究显示，重度少精子症新鲜精子行ICSI能获得较好的临床效果[7]。但是极重度少精子症有时新鲜精液中精子极少甚至可能出现取卵日无法找到精子，需要通过手术取精，而多次手术取精可能会导致睾丸创伤、降低睾丸功能、增加患者痛苦和经济负担。本研究中，极重度少精子症冻融精子可获得和新鲜精子及梗阻性无精子症睾丸冻融精子相似的效果，一定程度上避免了取卵日新鲜精液中找不到精子而要采取手术取精的概率。本研究结果，虽提示无统计学意义，但睾丸精子的正常受精率、卵裂率、优质胚胎率和临床妊娠率略高于另外两组，这可能与睾丸中新产生的精子遗传物质和胞质的中心粒等受损伤小及射出精子在男性生殖管道中储存和运输的过程中精子膜通透性改变、精子DNA完整性受损等有关。也有研究认为，附睾及输精管道可通过调控、修饰等作用促进精子的成熟并获得受精能力[8]。因此，睾丸精子和射出精子孰优孰劣仍有待进一步研究，而就ICSI结局而言，目前多数研究认为和精子来源、新鲜或冻融精子无明显相关性[9]。
精子冷冻在睾丸精子、附睾精子的保存中起着重要作用，而且复苏精子行ICSI有较好的疗效，然而如何对男性射精后获得的稀少精子进行冷冻保存仍然是技术难点[10]。本研究中，极重度少精子症患者平均需要2～3次才能完成冷冻，部分极重度少精子症患者甚至无法完成冷冻。也有部分冷冻精液复苏后无法找到精子，
综上所述，极重度少精子症冻融精子行ICSI，是一种有效的治疗方法，可降低手术取精的概率。稀少精子冷冻结合辅助生殖技术是一种有效的临床治疗策略，但精子冷冻复苏技术仍有待进一步提高。
参考文献
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