黄文立 王新华 黄莉娟
嘉祥县人民医院检验科，山东济宁 272400
[摘要] 目的 对临床生化检验中改良终点法和原终点法的作用进行对比分析。方法 临床对两种检验方法进行使用，对比分析改良终点法和原终点法之间的相关性以及线性浓度。结果 在检测结果差异对比中，两种方法差异不明显，不具有统计学意义（P＞0.05）；改良终点在正常浓度下的批内CV和总CV测定要高于原终点法，在异常情况下低于原终点法，两者之间差异显著，具有统计学意义（P＜0.05）；改良终点法在高浓度测量下其线性浓度测定范围要大于原终点法，两者之间差异显著，具有统计学意义（P＜0.05）。结论 在生化高浓度检验中，改良终点法应用优势明显高于原终点法，因此可以对改良终点法进行推广使用。
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关键词 ] 改良终点法；原终点法；生化检验
[中图分类号] R446.1 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2014）09（b）-0011-02
终点法在临床生化检验中的应用越来越广泛，在临床生化检验中，最为常用的实验为总蛋白、葡萄糖氧化酶法等。一般终点法在临床中是通过手工操作完成。本次在研究中严格依照其检测原理，对终点法的应用进行了一定的改良，也就是对其混合样品和试剂量减半，同时也要确保样品和试剂的比例与之前保持一致。将相同量的水在终点前加入其中并将其均匀稀释，之后测定其吸光度[1-2]。再把水在第二试剂中加入中，能够将单试剂终点法以及双试剂终点法在全自动生化分析仪上进行转换；注水第三试剂中，也能够相互转换双试剂终点法以及三试剂终点法[3-4]。本文补充时间，包括起止年月依据NCCLS制定的评价方案，比较分析了2013年1月—2014年1月标本检验改良终点法和原终点法的相关性，并评价了二者的精密度及线性，现报道如下。
1资料与方法
1.1 仪器和试剂
所用仪器为迪瑞CS-6400 全自动生化分析仪，在测定时保证仪器的工作状态良好；所用试剂为英国朗道标准血清，全部都是血清标本，并且确保这些标本没有出现脂浊和溶血等情况，其检测工作全部都在1 h完成；选择的是迪瑞液体单试剂型（氧化酶法）葡萄糖测定试剂盒；其中所选用的葡萄糖标准液，其规格精确为 [2.00 g/dl(111.00 mmol/L)]。
1.2 检验方法
1.2.1相关性检验 采用RANDOX标准血清进行定标，每次测定之后必须进行室内质控。其中原重点法的测光点为33、线性范围为0~16 mmol/L、样品量为4 μL、反应方向为上升、波长为510 nm、试剂量R1为300 μl以及单点定标为1-point；改良终点法的测光点为33、线性范围为0~20 mmol/L、样品量为2 μL、反应方向为上升、波长为510 nm、试剂量R1为150 μL以及单点定标为1-point。将10份临床标本依照NCCLS制定评价方法进行收集，将其葡萄糖浓度分成三个类型，分别是高、中、低，测定依照从小到大的顺序对其分别实施改良终点法以及原终点法，之后测定依照从大到小顺序对其采用改良终点法以及原终点法进行，对两次测定结果均值取出。选取200份标本，以连续实施10 d测量，其结果可以采用配对χ2检验和直线回归分析得出。两种测定方法的具体参数设计如表1所示。
1.2.2 精密度检测 按照美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）制定评价方案进行精密度测算，选取出两份质控血清，分别为正常浓度和异常浓度，将两者严格依照说明书进行复溶，之后分装在塑料管中，每一管为250μL，将管口封闭放置在-20℃环境中进行冷冻封存，在对其进行使用前以及使用后，均要将其分别进行融化到室温，每份浓度的质控血清在使用过程中均需要双份测定，并且还要定时定点进行试验，2批/d，上午一次，下午一次，对其实施连续20 d的测定，并且还要进行室内质控，对其批内的不精密度计算出来，之后对其总不精密度内进行计算。
1.2.3 线性评价 评价两种方法测定的线性范围时严格依据NCCLS 制定的评价方案。将111 mmol/L 葡萄糖标准液加入血清基质中，将5号高值标本（H）和1号低值标本（L）配置出来，二者的浓度分别为29.96 mmol/L和3.59 mmol/L，将二者混合均匀，2号、3号和4号的比例分别为3L：1H、2L：2H、1L：3H。2~4号标本的浓度为低值标本和高值标本之和与二者体积之比。
1.3 统计学处理方法
统计学处理具体说明统计软件名称和版本、所用检验方法、数据表示方法。
由专人在计算机中输入经整理校对的数据，运用统计学软件SPSS 21.0将数据库建立起来，计数资料采用%表示，用χ2检验，检验水准α=0.05。当P<0.05表示两组数据差异具有统计学意义。
2结果
2.1 相关性比较
本次试验回归方程
两种测定结果差异比较不明显（P＞0.05），其回归方程是：r=0.9992（n=100），y=1.0112x－0.0381。
2.2 精密度
在正常浓度下，和原终点法相比，改良终点法的批内CV以及总CV测定值要明显偏高（P＜0.05）；在异常浓度下，和原终点法相比，改良终点法的批内CV以及总CV测定值要明显偏低（P＜0.05）。具体见表2。
2.3 线性结果
改良终点法与原终点法的线性回归方程分别为y=1.070 5x－0.218 3，r=0.998 2和y=1.440 4x－2.939 7，r=0.979 1，低、中浓度下两种方法具有良好的线性关系，高浓度下改良终点法的线性浓度测定范围明显比原终点法宽（P<0.05）。具体见表3。
3讨论
本研究在血清葡萄糖的测定中，分别运用改良终点法和原终点法，在评价两种测定方法的精密度、线性等的过程中严格依据NCCLS 标准化文件中的方案，结果显示，两种测定结果差异比较不明显（P＞0.05）；在正常浓度下，和原终点法相比，改良终点法的批内CV以及总CV测定值要明显偏高（P＜0.05），异常浓度下改良终点法测定的批内CV和总CV均明显比原终点法低（P<0.05）；改良终点法与原终点法的线性回归方程分别为y=1.070 5x－0.218 3，r=0.998 2和y=1.440 4x－2.939 7，r=0.979 1，低、中浓度下两种方法具有良好的线性关系，高浓度下改良终点法的线性浓度测定范围明显比原终点法宽（P<0.05），说明在高值标本的测定中，改良终点法的精密度比原终点法好，且其测定线性范围也比原终点法宽。由于检测项目、品牌仪器、厂家试剂等直接而深刻地影响着测定的灵敏度及线性，因此临床应该严格依据试验有效设定程序的参数，为了从试验中得到更为准确的精密度和线性，为临床提供良好的诊断及治疗依据，在合适的情况下可以将样品和试剂的比例及反应稀释度适当改变[5-9]。
随着全自动生化分析仪在临床应用中广泛性的提高，临床生化检验的智能化和微量化特点也越来越明显，目前广大检验工作者的一个工作和研究重点就是在改良其临床检验方法中，需要加大对先进检测设备的应用，以此最大化的对其试剂成本进行降低[10-13]。本次研究在临床检验中对原终点法进行了一定的改良，其临床分析结果还比较让人满意，一般情况下可以对比高浓度标本进行稀释，其原因则是其具有较宽的测定线性范围，并且还在试验中对其试剂量减去一般，从而有效的实现了降低实际成本的要求[14-15]。其中黄健等[16]等也采用改良终点法和原终点法在临床中一个用，其得出结果为改良法比原发测定高浓度标本时具有更高精确度，改良法测定线性范围更宽，并且能够对其试剂成本节约。与本次研究结果一致，说明本次研究具有研究价值。
总之，在生化高浓度检验中，改良终点法应用优势明显高于原终点法，因此可以对改良终点法进行推广使用。
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（收稿日期：2014-07-20）