王能勇
四川省广元市中心医院检验科，四川广元 628000
[摘要] 目的 通过检测再生障碍性贫血（AA）患者血清中血管内皮细胞生长因子（VEGF）的浓度，探讨VEGF在AA临床诊断中的意义。方法 采用酶联免疫技术分别对26例AA患者及26例健康志愿者血清中VEGF的含量进行测定，考察VEGF与AA的相关性。结果 AA患者血清中VEGF的浓度为（48.6±22.8）pg/mL，健康志愿者血清中VEGF的浓度为（112.8±42.1）pg/mL，AA患者血清中VEGF的浓度明显低于健康志愿者血清中VEGF的浓度，两者差异有统计学意义（P<0.05）；VEGF的浓度与AA的程度呈正相关。结论 检测血清中VEGF的浓度具有快速、准确、方便等特点，对于临床诊断AA具有十分重要的意义。
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关键词 ] 再生障碍性贫血；血管内皮细胞生长因子；临床诊断
[中图分类号] R556 [文献标识码] A [文章编号] 1674-074２（２０１4）05（c）－０063-02
[作者简介] 王能勇（975.11-），男，四川广元人，本科，主管检验技师，主要从事血液病诊断的工作，研究方向：血液学检验。
再生障碍性贫血（Aplastic Anemia，AA）是临床一种非常严重的血液病，临床主要表现为全血细胞明显减少、发热、出血等症状，骨髓增生能力明显下降，导致造血细胞锐减甚至缺失，非造血细胞持续增加，目前AA的治疗比较困难，如能尽早发现并给予良好的临床治疗，可提高治疗效果。据文献报道，血管内皮细胞生长因子（VEGF）与AA有一定的相关性，AA患者血清中VEGF的表达较健康志愿者存在一定的差异[1-3]。该研究2010年6月—2012年6月采用合适的检查方法，对AA患者及健康志愿者血清中VEGF的浓度进行检测，以期探明VEGF与AA的关系，为临床诊断AA提供一定的参考，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
入选病例为该院血液科收治的26例AA患者，其中男14例，女12例，年龄12~56岁，平均年龄（45.6±12.2）岁，所有病例均符合《血液病诊断及疗效标准》中关于AA的临床诊断标准[4]。另26例健康志愿者中，男15例，女11例，年龄21~54岁，平均年龄（46.1±11.9）岁，经检查，各项生理功能均正常。AA患者及健康志愿者均同意参加临床研究并签署知情同意书。
1.2 血样采集
AA患者及健康志愿者在提供血样前，须禁食12 h。使用真空取样管抽取AA患者及健康志愿者的静脉血液5 mL，离心（2 500 r/min），分离得到血清标样品，分装于无菌管中，置于-20 ℃的冰箱中保存待测。
1.3 检测方法
临床检测血清中VEGF的浓度，采用酶联免疫吸附法（ELISA）进行检测，检测严格按照VEGF试剂盒的说明书及标准操作规程进行。具体步骤如下：将VEGF单克隆抗体包被于ELISA板上，加入AA患者或健康志愿者的血清，阴性对照品及标准品，置于恒温培育箱中培育，洗涤后加入酶标抗体，再置于恒温培育箱中培育、洗涤、显色、终止反应，即用酶标检测仪测定。用标准品稀释液浓度为横坐标，以标准品的OD值为纵坐标绘制VEGF的标准曲线。根据样品的OD值计算AA患者或健康志愿者的血清中VEGF的含量。
1.5 统计方法
采用SPSS13.5统计软件对数据进行分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验。
2 结果
AA患者血清中VEGF的浓度为（48.6±22.8）pg/mL，健康志愿者血清中VEGF的浓度为（112.8±42.1）pg/mL，AA患者血清中VEGF的浓度明显低于健康志愿者血清中VEGF的浓度，两者差异有统计学意义（t=6.837，P<0.05）；AA越严重，VEGF的浓度越低，在一定的范围内呈正相关。
3 讨论
再生障碍性贫血主要是因物理、化学、生物等因素或其它原因引起的人体骨髓造血干细胞损伤，进而影响造血功能，使造血功能减弱或出现衰竭，最终导致骨髓中正常的造血组织面积急剧缩小，全血细胞出现减少的一种临床综合征。已有文献报道[5-6]，人体的造血干细胞如要发挥其正常的造血功能，需在适宜的造血微环境中进行，当人体分泌的各种细胞因子，持续的刺激造血干细胞，才能出现正常的增生、分化、成熟。
人体的造血微环境是指除造血细胞以外的所有参加调控造血的成分，主要包括微血管系统、神经成分、网状细胞、基质细胞（成纤维细胞、内皮细胞、吞噬细胞、脂肪细胞）、细胞外基质及其它结缔组织等，统称为造血微环境，是造血干细胞赖以生成的场所，造血细胞在微环境各种因素的调控下增殖、分化、发育及成熟。如造血微环境的出现异常，主要是指骨髓微血管、基质细胞、神经体液调节因子、细胞因子、细胞外基质和粘附因子等的缺陷，影响了造血干细胞的增殖分化，当因外界因素的影响，造成造血微环境出现紊乱，是导致AA的主要原因之一[7]。
VEGF与血管的生成有极为密切的关系，近年来关于VEGF作用的研究比较多，据文献报道[8]，VEGF的家庭成员非常多，迄今已发现五种血管内皮生长因子受体，分别为VEGFR-1、VEGFR-2 （KDR/flk-1）、VEGFR-3（Flt-4）、neuropilin-1、neuropilin-1，且VEGF的生理作用也非常广泛，如在心血管系统、造血细胞及淋巴管的发育等方面具有非常重要的作用，但其作用的机制尚不十分清楚，尽管近年对这方面的研究非常多，但还没有一种具有说服力的理论或假说被广大学者所接受，目前的研究主要围绕在VEGF作为共同的途径促进肿瘤血管形成及演进，但是可以确定的是VEGF与AA有一定的相关性，AA患者血清中VEGF的表达较健康志愿者存在一定的差异，VEGF表达减少可能使其维持造血干细胞的生存、分化和发育的功能受到直接影响，因而可推测AA患者中VEGF的低表达可能与其发病有一定的相关性[8-9]。
临床研究结果表明，AA患者血清中VEGF的浓度显著低于健康志愿者，由此可见，AA患者的骨髓血管的生成和造血细胞的减少存在一定的关系，该研究通过采用酶联免疫吸附法，快速、准确、方便的测定AA患者血清中VEGF的浓度，得出AA越严重，VEGF的浓度越低，在一定的范围内呈正相关，为临床诊断AA提供了一定的依据，拓展了VEGF在AA诊断与治疗方面的应用。
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（收稿日期：2014-02-28）