陈祥娜
福建医科大学附属第一医院病理科，福建福州 350003
[摘要] 目的 结合该院在非小细胞癌（NSCLC）靶向治疗中，循环DNA检测EGFR基因突变的相关情况，对其临床价值进行评估。方法 从该院中选取接受EGDR TIKs治疗的54例患者，分别对其进行血清采集和组织采集，并制作成标本，对DNA进行提取检测。结果 女性出现基因变异的情况高于男性，差异有统计学意义（P<0.05）；组织类型、临床分析以及EGFR TIKs无基因突变误差，差异无统计学意义（P>0.05）；血清样本测定EGDR基因突变，特异性为97.30%；灵敏度为41.18%；所有患者的客观缓解率为27.78%，疾病控制率为48.15%；EGFR TKIs对晚期患者的客观缓解率为50.00%，对野生型的患者则只有16.67%。结论 在EGDR基因突变的测定中，血清循环DNA具有一定的价值，且可有效优化晚期肺癌靶向治疗患者的临床效果。
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关键词 NSCLC；循环DNA；EGDR基因突变
[中图分类号] R73 [文献标识码] A [文章编号] 1674-074２（２０１4）11（b）－０053-02
靶向治疗的出现极大的改善了晚期非小细胞肺癌患者的预后。肺癌组织的EGFR基因突变可以有效预测靶向药物EGFR-TKI的临床疗效。目前临床上多采用手术或穿刺标本来检测EGFR基因突变。但这种有创操作在一定程度上限制了EGFR基因突变的检测。研究发现肺癌患者循环血中游离DNA含量显著高于正常人，并与原发肿瘤组织具有高度的遗传一致性[1-2]。鉴于此，该院2011年1月—2014年6月期间在NSCLC靶向治疗中，运用血清循环DNA检测EGFR基因突变，对其临床价值进行评估。现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
从该院2011年1月—2014年6月所接诊的NSCLC患者中，选取54例采用小分子表皮生长因子受体细胞内酪氨酸激酶抑制剂（EGDR TIKs）治疗的患者；其中女性23例，男性31例，患者平均年龄为（65.41±1.24）岁；其中19例为非腺癌，35例为腺癌；患者中26例为Ⅲb期，28例为Ⅳ期；在进行采样时，24例为曾经或者正在接受EGDR TIKs治疗，30例为首次接受EGDR TIKs临床治疗。在获得患者同意之后，对其进行血清样本的采集，并同时进行石蜡组织标本的制作，所有患者均满足以下几点：①患者年龄在20岁或以上；②经细胞学或者病理学证实，患者为Ⅲb期或Ⅳ期，其中包括了初次治疗后复发或者未接受过化疗治疗的患者；③经ECOG功能状态评分，测评结果为0~2分，具有能够测量的病灶；④具有较高的依从性，并且能够及时到院或者电话接受随访；⑤无重要脏器功能障碍。
1.2 方法
1.2.1 样本采集 ①血清样本采集：提前一日叮嘱患者清晨空腹接受静脉血采集，每例患者采集5 mL，于黄色促凝管内室温放置4 h后，离心分离血清， -80℃下保存待用；②石蜡组织样本采集：选取肺穿标本或者手术标本肿瘤部分，切取10张6 μm的蜡片，置于Eppendorf管内编号保存备用。
1.2.2 DNA的提取 ①血清样本DNA的提取：该研究选取Qiagen公司试剂盒QIAamp DNA Blood Mini Kit，并按照说明书进行血清循环DNA的提取；②石蜡组织样本DNA的提取：本研究选取QIAamp DNA FFPE Tissue Kit，并按照说明书进行血清循环DNA的提取。
1.2.3 EGFR突变检测 该研究使用ARMS（amplified refractory mutation system）法进行EGFR突变检测。
1.3 EGFR TIKs的治疗方法
为患者提供EGFR TIKs口服治疗，每日服用尼洛替尼150 mg，在进食前1 h或者进食后2 h服用；或者在空腹状态下，与食物共同服用的情况下，服用250 mg吉非替尼。直到患者出现不可耐受的药物毒副作用或者肿瘤疾病进展；在治疗前1周对患者的身体状态进行全面评估。
2 结果
2.1 血清及组织标本中
EGFR 基因突变型患者的临床分布特征 女性出现基因变异的情况高于男性，差异有统计学意义（P<0.05）；组织类型、临床分析以及EGFR TIKs无基因突变误差，差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。
2.2 血清 EGFR 基因突变检测的真实性和可靠性评价
通过血清样本测定EGFR基因突变，其特异性达到了97.30%；灵敏度则达到了41.18%。见表2。
2.3 EGFR 基因突变与 EGFR TKIs 疗效关系
所有患者的客观缓解率为27.78%，疾病控制率为48.15%；其中EGFR TKIs对晚期患者的客观缓解率为50.00%，而对野生型的患者则只有16.67%。见表3。
3 讨论
人类表皮生长因子受体（EGFR）是一种受体酪氨酸激酶，正常情况表达于上皮细胞表面，而在一些恶性肿瘤中常过度表达。EGFR基因突变包括基因扩增和点突变，主要集中在18、19、20、21号外显子上，第19外显子的缺失和第21外显子的L858R点突变，占到89%~95.5%，与肿瘤对TKIs的敏感度有重要关系。60%～85 %的NSCLC细胞存在EGFR过度表达/突变，这部分患者接受肿瘤分子靶向治疗（EGFR抑制剂）的临床疗效优于常规化疗。临床研究表明，肺癌细胞中有EGFR酪氨酸激酶基因编码区外显子19缺失或外显子21突变的患者，靶向药物易瑞沙的有效率高达80％以上[3]。该研究中主要针对 19 和 21外显子的突变型检测，其中 19 外显子突变为55.56%(10/18)，21 外显子突变为44.44%(8/18)；所检测出的基因突变型(19DelK746-A750、19DelK745-E749、19DelK745-A750；21 L858R、21 L861Q)与当前研究显示的已检测出的基因突变类型及突变率相符。
一些临床实验结果进一步证实，通过筛查EGFR基因突变对肺癌初治患者进行吉非替尼治疗，中位无进展生存时间达到12个月，中位生存时间达到20个月[4]。因而针对EGFR突变进行选择性靶向治疗，患者可以显著获益[5]。
2013年5月，美国病理学家协会(CAP)、国际肺癌研究协会(IASLC)和美国分子病理学会(AMP)三大权威机构发布了一项基于循证医学证据的肺癌分子检测指南，建议所有晚期肺腺癌患者不论性别、种族、是否吸烟或伴有其他临床危险因素，均应接受EGFR突变和ALK融合基因检测，以判断是否适于接受酪氨酸激酶抑制剂治疗[6]。但是对于晚期肺癌患者，其肿瘤组织标本往往难以获得，或不能取得足够适合检测的标本。这就需要一种能方便取得EGFR突变信息的检测方法[7-8]。
在该次研究中，对血清循环DNA与肿瘤组织DNA的突变检测结果进行对比，结果表明，血清游离DNA检测到的突变类型与组织检测到的类型无差异，依据血清EGFR检测结果进行选择性靶向治疗，可以使患者显著受益。由于血液采集方便，患者易于接受，血清EGFR检测技术可以作为肿瘤组织EGFR检测的补充与替代，值得临床推广应用。但是，由于检测还具有一定的局限性，故表现出相应的假阴性率，故在实际应用中，还需要与其他检测手段同时使用。
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参考文献
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（收稿日期：2014-08-16）