张耀红1，葛京1，高倩1，妥志利2，徐建华2，尹殿江2，薛建敏3
（1.保定市水产技术推广站，河北 保定 071000；2.涞源县畜牧业发展服务中心，河北 涞源 074300；
3.河北省水产养殖病害防治监测总站 石家庄 050011）
基金项目：河北省现代农业产业技术体系淡水养殖创新团队资助。
作者简介：张耀红（1966.12-），女，推广研究员，保定中华鳖和冷水鱼高效养殖综合试验推广站站长。bdsczyh@sina.com
DOI:10.3969/j.issn.1004-6755.2014.12.013
七彩鲑鱼（Salvelinus Fontinalis），学名美洲红点鲑，属于鲑形目、鲑科、红点鲑属，与北极鲑、雷克鲑、多丽鲑、公牛鲑并称五大名鲑。主要分布于加拿大东部的拉布拉多地区，因其体表像珠宝一样光彩夺目，故而在加拿大七彩鲑又被誉为冰水皇后。
七彩鲑引入我国已有十几年的历史，人工养殖、人工繁殖、病害防治等在我国均获得成功，河北、甘肃、北京、山东等地也已形成了一定的规模，取得了较好的效益，这些在相关文献中多有报道，但关于该鱼胚胎发育方面的报道较少。系统地观察七彩鲑的胚胎发育，对其发育过程进行详尽的描述为同行提供技术参考是很有必要的。
1材料与方法
1.1材料
试验亲鱼为河北省冷水鱼良种场——涞源昌源渔场培育的4龄盛产亲鱼，平均规格2.1 kg/尾。2013年10月底，亲鱼陆续自然成熟，人工采卵、授精，将11月3日所获受精卵3万余粒用作胚胎发育观察。
1.2方法
将受精卵放入平列槽中流水孵化，孵化期间水温9～14.5 ℃，溶氧 6.0～8.5 mg/L，控制水量12～18 L/min。每隔2 h随机采卵30～50粒，采用1～4.5连续变倍体视显微镜（目镜10×物镜1～4.5）观察。以观察卵数的30%以上个体达到某个时期计为该发育阶段的起始时间，从前一发育阶段到下一发育阶段的起始时间为间隔时间，记录起始阶段水温，对各个时期的典型特征进行拍照。为避免拍照观察对试验卵受刺激产生发育误差，故观察后的卵单独孵化。
2结果
在孵化水温9～14.5 ℃条件下，七彩鲑受精卵到孵化出膜历时673 h。胚胎发育过程受精卵阶段、卵裂阶段、囊胚阶段、原肠阶段、神经胚阶段、器官形成阶段。主要发育时期见表1。
2.1受精卵
七彩鲑鱼的成熟卵为圆形，黄色，有粘性，比重大于1，含大量卵黄。吸水前22～24粒/g，卵径4.0～4.2 mm；受精卵吸水55 min，卵径达最大为4.2～4.5 mm，21粒/g左右；卵黄与卵膜之间出现周隙。受精后2～3 h，原生质逐渐向动物极集中，并在卵球表面隆起出现盘状胚盘，卵质分布均匀。
2.2卵裂期
10 h后，受精卵出现第一次卵裂，开始卵裂为经裂，胚盘中央产生裂痕并逐渐加深形成分裂沟，进而将胚盘一分为二，为2细胞期；第二次卵裂与第一次垂直，形成4个大小均等的细胞为4细胞期；10.5 h即有8细胞出现，同时仍有4细胞存在。之后经过16细胞、32细胞，进入多细胞期（图1）。此时，分裂球越来越小，层次越来越多，界限逐渐模糊，排列规律不太明显，多层细胞高高位于卵黄之上，形如桑葚，进入桑葚期（图2）。
2.3囊胚期
受精后48 h，随着细胞的持续分裂，分裂球呈半圆形堆积在卵黄上方，与卵黄物质交界明显，此时隆起最高为囊胚早期（图3）；细胞继续分裂，囊胚边缘细胞逐步增多，胚盘面积不断变大，开始向植物极下包和内卷，囊胚顶端变得稍稍扁平，胚胎进入囊胚中期（图4）；受精99 h后，囊胚细胞继续下包内卷，胚盘高度下降变为扁平贴在卵黄囊上，并形成不太明显的胚环，进入囊胚晚期（图5）。
2.4原肠期
受精121 h后，囊胚细胞继续下包，内卷明显，胚胎中轴部分出现增厚的盾状突起即胚盾，此时下包到卵黄的1/3，为原肠早期；受精127 h，胚环继续下包到1/2，胚盾明显增大，进入原肠中期（图6）；受精155 h，胚盘下包到卵黄2/3处，植物极由胚层包裹形成胚孔，进入原肠晚期（图7）。
2.5神经胚期
受精后179 h，神经板形成，脑部逐步膨大可看出头部雏形，胚盘下包4/5，未包入的卵黄形成卵黄栓，受精后205.5 h胚孔继续收缩，逐步合拢关闭，脊索呈柱状，脑泡原基清晰可见，胚体初步形成。
2.6器官形成期
受精224 h，进入肌节分化期。肌节先在胚体后部分化，最初隐约可见4对肌节对称分布，随后肌节数量陆续增多，胚体前部肌节也清晰可辨。受精后232 h，在脑两侧出现一对肾状突起，为眼原基（图8），之后脑开始分化，明显分为前、中、后脑，随后在头部后方出现胸鳍原基；受精后310 h，眼原基进一步发育形成长椭圆形眼囊（图9）；受精后323 h，尾部从卵黄囊分离变细，形成尾牙；受精348 h，眼原基发育形成晶体；受精后373 h，胚体开始微弱的肌肉收缩，6次/min；受精后404 h，眼部开始出现黑色素，眼囊逐步变黑，进入发眼卵阶段（图10）；受精后475 h可看到扁圆状心脏搏动，70次/min；周身血流清晰，卵黄囊上分布大量血管，血液为淡红色，进入循环期（图11）。随着发育时间的延长，心脏变为红色，心室心房清晰，血管分布清晰，血液循环清晰，心脏搏动频率增加至100次以上，跳动幅度大而有力；受精后753 h，胚体在卵膜内不停地转动，肌肉抽动加剧，心跳达106～120次/min；卵膜变薄，在胚体运动的牵拉下破膜而出。经过观察，绝大多数以头部破膜（图12）。刚破膜的仔鱼头部向卵黄囊弯曲，长度0.9～1.1 cm，静卧水底，卵黄囊为长椭圆形。
3讨论
七彩鲑作为引进的冷水鱼类，目前未见有其详细、系统胚胎发育的研究报道。七彩鲑鱼卵裂方式和胚胎发育时期与虹鳟及大多数硬骨鱼类相同，都分为6个大的阶段[1]。在水温9～15 ℃，溶氧、pH等因子在最适宜范围时，七彩鲑卵需要753 h、394.5 ℃·d破膜。与同批孵化的虹鳟比较，发眼较虹鳟晚51～60 ℃·d，破膜较虹鳟晚10～15 ℃·d。与同科的几种冷水鱼比较，该鱼的卵也是寡质卵，沉性，卵膜较厚，富含脂肪滴，卵黄较多，胚盘较小，发育时间长。成熟卵为淡橙黄色或黄色，直径为4～4.2 mm，显著小于虹鳟卵径5.236 mm[2]，显著小于哲罗鲑卵径5.55 mm[3]，显著小于白点鲑卵径6.17±0.15 mm，与细鳞鲑的受精卵卵径4.32±0.21 mm基本相同[4]，显著大于白斑狗鱼卵径2.20 mm(乔德亮等，2005)[4]，显著大于江鳕卵径0.8～1.0 mm(高晓田等，2011)[5]。
张永泉等报道：卵径的大小是影响鱼类破膜所需时间与积温的因素之一，而温度对鱼类破膜所需时间和积温的影响要强于卵径大小；卵径是决定初孵仔鱼全长的重要因素。殷名称指出，卵的大小与初孵仔鱼大小密切相关，一般个体大的仔鱼生长迅速，存活率高[6]。我们在胚胎发育观察过程中也发现了个体大的胚胎，心脏跳动更有利，破膜整齐，破膜后死亡率较低。因此，建议在选择亲鱼时，不仅考虑产卵量，还要选择所产卵的卵径要大，可以更好地提高初孵仔鱼的生长与成活率。
本次试验，未对七彩鲑卵采取剥膜处理，虽然不影响明显的发育分期标志的观察，但直接影响拍照效果，因而虽能较准确地分期，但可用的图片寥寥。在今后沉性大卵径鱼卵的观察中，最好用透明液、胰蛋白酶对卵进行预处理，使卵膜变薄或采用甲醛固定剥除卵膜。
教育期刊网 http://www.jyqkw.com
参考文献：
[1] 刘雄，王昭明，金国善，等.虹鳟养殖技术[M].北京：中国农业出版社，1990
[2] 黄金善，等.沉性大卵径鱼卵的观察方法与虹鳟的胚胎发育[J].经济动物学报，2005，9（4）：236-238
[3] 张永泉，尹家胜，等，哲罗鲑胚胎和仔鱼发育的研究[J].大连水产学院学报，2008，23（6）：425-430
[4] 乔德亮，李思发，凌去非，等.白斑狗鱼胚胎和卵黄囊期仔鱼发育[J].上海水产大学学报，2005，14（1）：12-18
[5] 高晓田，肖国华，等.江鳕胚胎发育的研究[J].淡水渔业，2011，41（6）：85-90
[6] 殷名称.鱼类生态学[M].北京：中国农业出版社，1995，134-272
（收稿日期：2014-11-08）