蒋 烈 常伟冰 周 滔
江苏省常熟市疾病预防控制中心，江苏常熟 215500
[摘要] 目的 对某社会福利院老年公寓发生的一起急性老人群体性肠胃炎疫情中采集的标本采用实时荧光PCR方法（RT-PCR）进行诺如病毒核酸检测。 方法 采集该老年公寓患病老人、护理人员的肛拭子共8份。 结果 本次疫情中，在5份患病老人和2份护理人员的肛拭子标本中检出诺如病毒Ⅱ型（GⅡ）。 结论 本次疫情爆发蔓延可能是由于带病上班的工作人员在护理和分发餐点过程中将诺如病毒传染给老人并引起交叉感染所致。
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关键词 ] 诺如病毒；老年公寓；实时荧光；胃肠炎疫情
[中图分类号] R181.8 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2014）11（c）-0031-02
诺如病毒又名诺瓦克病毒，属于人类杯状病毒科诺瓦克样病毒属，由其感染引起的主要症状是恶心、呕吐、腹泻。该病毒传染性强，以肠道传播为主，可通过污染的食物、水源、生活接触或吸入空气中的病毒气溶胶传播[1]。由诺如病毒感染引发的胃肠炎疾病在全世界广泛流行。本次实验利用RT-PCR检测技术，对常熟市某社会福利院老年公寓发生的一起急性群体性肠胃炎疫情中采集的标本进行诺如病毒核酸检测，确定病原，并结合现场流行病学调查资料对此次事件总结分析。
1资料与方法
1.1基本情况
2012年12月10日常熟市疾控中心接某社会福利院电话报告，称该院有一个病区自本月初以来先后有十多名老年人出现腹泻、呕吐等症状。经调查，该院共收住年龄在70岁以上的老人410名，工作人员180名。住院老人饮食主要由该院食堂统一加工后送至各病区，再由病区的工作人员进行分餐送给各老人，生活不能自理者由护理人员喂服。目前腹泻、呕吐病例均集中在某一病区，该病区共有20名生活不能自理的老人，分别住在8个房间，由9名护理人员轮班护理。
1.2流行病学资料
1.2.1主要症状经现场调查，该病区自2012年11月29日起—2012年12月9日，先后有15人（男8人、女7人）出现呕吐、腹泻等症状。15例患者的临床症状分布为：呕吐7例（100岁、93岁、79岁、78岁、76岁、47岁、45岁各一例）、腹泻3例（86岁两个人、74岁一人）、呕吐伴腹泻5例（87岁、83岁、72岁、42岁、51岁各一人）。
1.2.2患者治疗情况其中一例患者因两次呕吐呈咖啡样呕吐物，且年龄过大（100岁）而由院方动员其家属外送医院治疗外，其余患者均由该院卫生所负责治疗。患者经对症治疗，愈后效果良好，无重症和死亡病例。
1.2.3首发和次发病例首发病例为一男性老人，于2012年11月29日出现发热（38℃）、恶心等症状，伴呕吐、腹泻各一次，次日起每天腹泻2～3次，无呕吐。次发病例为该病区一女性护理人员，于2012年12月1日出现呕吐症状。
1.2.4患者年龄及空间分布15例患者中11例为该病区住院老人，年龄均在70岁以上，分布在该病区7个房间（病区共有8个房间，目前除104室无相同症状病例外，其余房间均有病例发生）。其余4人为该病区护理人员，主要负责老人的日常起居及饮食分发等工作。
1.2.5发病时间分布发病时间与发病人数见图1。
1.3材料
1.3.1标本与12月10日采集该社会福利院老年公寓急性胃肠炎患者肛拭子标本8份，其中患病老人6份，患病护理人员2份（同一护理班次）。用无菌棉签采集肛拭子置于病毒采样管，冷藏运送至实验室检测。
1.3.2试剂核酸提取试剂、诺如病毒GⅠ/GⅡ双重荧光核酸检测试剂均由江苏硕世生物科技有限公司提供。
1.3.3仪器ABI7500fast实时荧光定量PCR仪；FRESCO21高速冷冻离心机；HFsafe-900Ⅱ级生物安全柜（上海力申）。
1.4实验方法
1.4.1提取病毒核酸取200μL病毒采样管中的保存液，按照江苏硕世生物科技有限公司提供的核酸提取试剂盒说明书，手工提取核酸，得到约50μL的核酸提取液，备用。
1.4.2实时荧光RT-PCR扩增反应：采用江苏硕世生物科技有限公司提供的诺如病毒GⅠ/GⅡ双重荧光核酸检测试剂。根据本次实验的标本数和阴性、阳性参考品各一管，配制共10份20μL/份的反应体系于扩增管中，吸取备用的核酸提取液5μL加入扩增反应体系，于最后两孔扩增管中加入阴性对照和阳性对照，盖好盖子，密封扩增管。将混合好的扩增管在ABI7500fast实时荧光PCR仪上进行扩增反应。扩增反应体系的配制和荧光PCR反应参数按照试剂盒说明书。
1.5质量控制
1.5.1阴性参考品RT-PCR反应结束后无典型S型扩增曲线。
1.5.2阳性参考品RT-PCR反应结束后呈典型S型扩增曲线或Ct值≤30。
1.5.3在本次实验中，需同时满足以上两个要求，否则本次实验无效。
1.6结果判读
实验检测采用ABI7500softwareV2.0.6分析软件对结果进行分析。在仪器正常，阴性参考品、阳性参考品均符合质量控制条件的情况下，FAM通道扩增曲线呈典型S型曲线且CT≤35，判断为诺如病毒GⅠ阳性；无典型S型扩增曲线或者CT＞35，判断为诺如病毒GⅠ阴性。VIC通道扩增曲线呈典型S型曲线且CT≤35，判断为诺如病毒GⅡ阳性；无典型S型扩增曲线或者CT＞35，判断为诺如病毒GⅡ阴性。
2结果
2.1病毒检测
采集8份患者肛试子，其中5份患病老人和2份护理人员的肛拭子标本检出GⅡ，阳性率为87.5%（7/8），1份患病老人肛拭子标本未检出。首发病例和次发病例均检出GⅡ。各房间老人及护理人员的检测结果见表1。
2.2控制措施
①对老年患者及时进行隔离、治疗，一旦有重症病人立即转市级医院治疗。
②检出阳性的护理人员暂时调离工作岗位，特别不得从事接触直接入口食物的工种，在症状完全消失后一周方可恢复相关工作。
③加强食品和饮用水的卫生安全管理，注意分餐环节的规范操作，该病区的餐具使用后经充分清洗并消毒后再放入保洁器具内保存备用，且不与其他病区混用。
④对该病区的配餐间、开水间、卫生间、病房及其他公共场所加强通风，并进行彻底清洗消毒。
⑤加强病人排泄物、呕吐物的消毒处理。
2.2.6对全院员工，特别是医务人员、护理人员进行一次健康教育，普及预防急性胃肠炎相关知识，提高意识。
3分析与讨论
根据此次疫情中病例的临床症状、现场流行病学调查及实验室检测结果，可认定为一起诺如病毒Ⅱ型感染引起的急性胃肠炎疫情，发生疫情蔓延的原因可能是由带病上班的工作人员在护理和分发餐点过程中将诺如病毒传染给老人并引起交叉感染所致。分析资料和检测结果，主要依据如下：①基本排除细菌性食物中毒事件，因该社会福利院所有老人餐饮均由该院负责供应，所有老人有进食相同食谱史，而发生胃肠炎症状的病例均集中在某一病区，并且该病区先后出现患者共有十多天，无集中爆发时间段，其他病区无人员出现类似症状。②本次疫情中暴露和发病时间存在一致性，随着时间推进，患者人数出现明显进展性，符合人-人传播模式。③首发病例老人一处于封闭居住状态，接触外环境感染可能性小，而次发病例护理人员一和首发病例老人一出现症状的间隔时间较短，可能是未表现出临床症状的患病护理人员一在护理工作时将病毒传染给抵抗力较弱老人一，导致病毒在该病区的102室的老人间传播，并且感染同一护理班次的护理人员二，两名患病护理人员通过护理其他房间内的老人使GⅡ在该病区内进一步扩散，造成该次疫情爆发蔓延。④随着检测确定病原，实施控制措施，疫情得到控制，无新发病例出现，有明显的终止效应。
随着RT-PCR检测技术的推广应用，近几年国内多次报道由诺如病毒感染引起的胃肠炎疫情，证实诺如病毒是引起非细菌性胃肠炎爆发流行的主要病因，已成为重要的公共卫生问题[1-3]。国内人群普遍易感，一般好发于冬春季节，属于自限性疾病，能加重儿童和老年患者的病情而引起死亡，病原学检测以GⅡ感染为主[4-6]。本次事件中8份标本检出7份GⅡ阳性，符合相关报道。荧光实时RT-PCR检测技术特异、快速、灵敏的特点在本次应急事件中充分体现，为确定病原，制定正确处置措施提供了强有力的保障，大大提高应急事件响应处置效率和效果，值得基层疾控大力推广。
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参考文献]
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（收稿日期：2014-09-03）