李凤英 刘军礼 刘美宁 马 波 罗文瑞 马 婷 邹利媛
咸阳市疾病预防控制中心免疫规划科 陕西省咸阳市 712046
【摘 要】目的：了解2013 年咸阳市健康人群脑膜炎奈瑟菌带菌率状况。方法：采用生化试验、氧化酶试验、PCR 试验等方法，检测咸阳市200 例健康人群血样，分析脑膜炎奈瑟菌阳性情况。结果：经细菌培养，奈瑟菌共检出6 例，我市健康人群奈瑟菌带菌率为3.00%；经定性PCR 实验对6 例带菌者中有2 例为阳性片段，其中1 例为C 群，1 例为B 群。结论：我市强化免疫接种措施取得显著成效，但应继续开展带菌率监测，进一步控制流行性脑膜炎的发病率，保护广大居民的身体健康。
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关键词 脑膜炎奈瑟菌；带菌率；监测
自咸阳市实施扩大免疫规划程序以来，流行性脑膜炎在我市的发病率呈明显的下降趋势[1]。近年来，我市流行性脑膜炎发病率均保持在1/10 万以下。为了解咸阳市健康人群脑膜炎奈瑟菌（Nm）带菌状况，制定更有效的流脑防治措施及策略，咸阳市疾病预防控制中心于2013 年8 月开展了咸阳市健康人群脑膜炎奈瑟菌带菌率监测，现将结果总结报告如下：
1 研究对象及方法
1.1 研究对象
根据过去3 年流脑平均发病水平、人口、地理分布特点等因素，选择泾阳、三原县为监测点，每个监测点分5 个年龄组（3 ～ 4 岁、5 ～ 6 岁、7 ～ 14 岁、15 ～ 19 岁、≥ 20 岁年龄组）进行健康人群带菌率监测。每个监测点每年龄段严格按照随机原则抽取20 人，本次共监测200人。
1.2 标本采集
依据WS259-2008 脑膜炎奈瑟菌实验室检测方法采集研究对象的咽拭子标本，并对样本进行统一编号。
1.3 检测方法及判定标准
1.3.1 检测方法
用无菌长柄棉签采集其咽后壁两侧分泌物，立即接种于卵黄双抗培养基，采集完后尽快将已接种的培养基送到实验室，37℃、5%CO2 培养24h 挑取疑似菌落进行分纯，然后做生化试验，染色镜检，氧化酶试验，血清学鉴定。
1.3.2 PCR 检测
主要仪器、设备：博日定性PCR 仪、SLAN96P、定性PCR 反应试剂由之江公司提供。反应参数：94℃，3min；40×（94℃，20s；TM ℃，20s；72 ℃，30s；）72 ℃，10min。
1.3.3 脑膜炎奈瑟菌判定标准
菌落典型，镜下为革兰阴性双球菌；盐水无自凝现象，氧化酶试验阳性；普通琼脂平板上不生长；生化试验：葡萄糖+麦芽糖+ 蔗糖- 乳糖- 果糖-；血清学试验：应与分群血清凝集。
1.4 数据处理
应用SPSS16.0 和SAS9.2 对所得资料进行统计处理，检验水准α=0.05。
2 结果
2.1 咸阳市健康人群奈瑟菌带菌率状况经细菌培养，本次监测结果显示：经细菌培养，奈瑟菌共检出6 例，我市健康人群奈瑟菌带菌率为3.00%，该6 例病例基本资料如下：男性4 例，女性2 例；年龄：8 ～ 28（4.22±6.51）岁；泾阳县4 例，三原县2 例；4 例具有A 群流脑免疫史，3 例具有A 群+C 群流脑免疫史；6 例奈瑟菌带菌者均来自农村。
2.2 定性引物扩增电泳结果
采用定性PCR 实验对6 例带菌者血样进一步确定种群。由定性引物扩增电泳结果图可见，6 例标本中，扩增出2 个阳性片段，将这2 个阳性片段送测，结果显示2 例阳性结果中，其中1 例为C 群（引物：YF-siaD-C-3R），另1 例为B 群（引物：YF-siaD-B-2R）。
2.3 奈瑟菌DNA 测序结果
样本测序结果与数据库各血清群序列比对结果如下，划红线序列为样本。第一份样本DNA 碱基序列与目的基因（BAY234192.1）完全重合，第二份样本DNA碱基序列与目的基因（C-HM037270.1）完全重合，结果与PCR 结果一致。
3 讨论
我市2013 年健康人群脑膜炎奈瑟菌率监测，首次采用了“细菌培养-PCR 实验检测-DNA 测序”的监测技术及程序。细菌培养方法较为传统，在一定程度上假阳性率高，无法确定细菌亚群。PCR 实验可弥补细菌培养的不足，同时能够对细菌进行准确的分型定性。再此基础上采用DNA测序，可以进一步印证PCR 实验的准确性，在碱基片段的识别基础上，准确定位细菌种类、亚群等。本次经细菌培养检出6 例脑膜炎奈瑟菌带菌阳性者，采用PCR 实验及DNA 测序，确定2 例为脑膜炎奈瑟菌，其中B 群1 例，C 群1 例。提示：咸阳市应继续加强A+C 群流脑疫苗的查漏补种、强化免疫等工作；同时开展带菌率监测，若条件允许，应开展A 群、B 群流脑疫苗的免疫接种工作，对散居儿童、流动人口等高危人群优先开展此项工作，进一步降低我市健康人群脑膜炎奈瑟菌带菌率，控制流行性脑膜炎的发病率，保护广大居民的身体健康。
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参考文献
[1] 刘美真, 管大伟, 邓小玲等. 广东省首例W135 群流脑的病原学分析[J].华南预防医学,2008,34(3):26-28.
[2] 田晓辉, 夏昕, 王敏等. 张家界市首例C 群流脑死亡病例及其密接人群中分离的脑膜炎奈瑟菌实验室分析和PFGE 分型[J]. 实用预防医学,2012,19(9):1311-1295.
作者简介
李凤英（1983-），女，山东省济宁市人。大学本科学历。现供职于咸阳市疾病预防控制中心免疫规划科，主要从事常见传染病的预防、控制、监测工作。