苏映琼
雅安职业技术学院药学检验系，四川雅安 625000
[摘要] 目的 通过检测HIV感染合并慢性腹泻患者的粪便标本，来分析这些患者的病原微生物的感染状况，从而使患者能够得到及时的治疗。 方法 收集我院的2008年1月—2013年6月的一共79例HIV感染合并慢性腹泻患者的粪便为标本，然后对这些标本进行涂片及染色检查。采用常规的粪便培养来检测沙门菌、志贺菌、真菌以及肠侵袭性大肠埃希菌；直接涂片检测蓝氏贾第鞭毛虫；革兰染色检测真菌孢子以及菌丝；抗酸染色检测分枝杆菌；改良的抗酸染色法来检测隐孢子虫；微需氧培养检测空肠弯曲菌；金标法来检测难辨梭状芽孢杆菌。结果 79份标本，47份标本检测出有病原微生物的感染，阳性率是59.49%，其中感染真菌最多，有22株，感染隐孢子虫有13株，感染结核分枝杆菌有6株，感染难辨梭状芽孢杆菌有3株，感染空肠弯曲菌有2株，感染沙门菌有1株。结论 HIV感染合并慢性腹泻患者最易感染真菌，其次就是隐孢子虫，分枝杆菌和难辨梭状芽孢杆菌感染率也比较高，因此值得临床医生的重视，积极的寻找病原，从而使患者能够得到及时的治疗。
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关键词 ] HIV；慢性腹泻；粪便；病原微生物
[中图分类号] R446.5 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2014）02（c）-0024-02
HIV-infected patients with chronic diarrhea stool specimens Detection of pathogenic microorganisms
SU Yingqiong
Yean Vocational and Technical College of Pharmacy Department of Laboratory Yean, Sichuan 625000, China
[Abstract] Objective By detecting HIV infection in patients with chronic diarrhea, stool samples to analyze these patients infection of pathogenic microorganisms, so that patients can receive timely treatment. Methods My hospital in January 2008-2013 in June a total of 79 cases of HIV-infected patients with chronic diarrhea stool specimen was then carried out on these specimens smear and staining. Using conventional fecal culture to detect Salmonella , Shebelle bacteria, fungi, and intestinal invasive Escherichia coli ; direct smear testing Ramsey Guardia labia ; Gram staining, fungal spores and hyphen ; detection of acid-fast staining mycobacterium ; modified acid-fast staining method to detect Cryptosporidium ; micro- aerobic culture detection of Campylobacter jejune ; gold standard method to detect Clostridium difficult . Results 79 specimens , 47 specimens detect infected with pathogenic microorganisms , the positive rate was 59.49% , of which a maximum of fungal infection , there are 22 , are infected with Cryptosporidium 13 , Mycobacterium tuberculosis infection has six , infection Clostridium difficult have 3 , Campylobacter jejune infection has two , there is a Salmonella infection . Conclusion HIV infection in patients with chronic diarrhea, the most vulnerable to fungal infection , followed by Cryptosporidium , mycobacterium, and Clostridium difficult infection rates are relatively high, it is worth the attention clinicians actively looking pathogen , allowing patients be able to receive timely treatment .
[Key words] HIV; Chronic diarrhea ; Faces ; Pathogenic microorganisms
HIV，顾名思义就会造成人类免疫系统的缺陷，该病毒会破坏人体的免疫能力，最终导致免疫系统失去抵抗力，会导致患者患各种疾病。50%的HIV患者会有肺部感染，30%的患者会有中枢系统的脑损害如意识障碍、痴呆等，病情严重的还会导致患者死亡。消化道是艾滋病并发机会性感染时常见受累的部位之一，大约有90%以上的HIV感染者可以出现消化道的症状[1]。因此本次我们就收集我院的2008年1月—2013年6月的HIV感染合并慢性腹泻患者的粪便为标本，然后对这些标本进行涂片及染色检查，以分析这些患者的病原微生物的感染状况。现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
收集2008年1月—2013年6月的一共79例HIV感染合并慢性腹泻患者的粪便为标本。其中这些患者中，男性患者有49例，女性患者有30例，年龄19~72岁，平均年龄（43.7±9.8）岁。
1.2 诊断标准
入组的79例HIV感染者均经过Western blot确认为是抗-HIV阳性的；患者慢性腹泻次数>3次/d，腹泻的时间>2个月。并且同时要排除近2个月以来接受过影响本试验的药物治疗的患者以及服用蛋白酶类抑制剂和抗病毒药物治疗从而导致慢性腹泻的患者，肠镜检查排除肠道肿瘤和慢性溃疡性结肠炎的患者。
1.3 材料与试剂
麦康凯琼脂培养基、中国蓝琼脂平板、SS琼脂平板、含有氯霉素的沙保罗琼脂平板、SKIRROW培养基；革兰染色液（碱性染料、媒染剂、脱色剂和复染液）和抗酸染色液（石炭酸复红、3%盐酸酒精和吕氏美兰液）；艰难梭菌毒素金标法检测试剂盒。
1.4 方法
1.4.1 粪便的常规培养 将患者的新鲜粪便接种到弱的选择性培养基麦康凯琼脂培养基（MAC）或者中国蓝琼脂平板、强选择性的培养基SS琼脂平板上和含有氯霉素的沙保罗琼脂平板各一块，然后将这接种好的平板放在35℃培养箱中培养24 h，检测沙门菌、志贺菌、真菌以及肠侵袭性大肠埃希菌。
1.4.2 涂片检测 79份粪便标本进行及时的涂片，可以直接涂片来检测原虫。革兰染色来检测真菌孢子及菌丝，用含氯霉素的沙保罗琼脂平板培养粪便标本，如果培养阳性，就会在显微镜下见到大量的真菌孢子或者菌丝。抗酸染色来检测分枝杆菌，一般用的是萋-尼（Ziehl- Neelsen)抗酸染色法，以5%石碳酸复红加温染色后可以染上，但用3%盐酸乙醇不易脱色，若再加用美蓝复染，则分枝杆菌呈红色，而其他细菌和背景中的物质为蓝色，若为阳性结果，在显微镜下就可见细长略带弯曲的杆菌。采用甲醛-乙酸乙酯沉淀法对标本进行集卵，这样可以提高检出率，再用改良的抗酸染色法对标本进行染色检测隐孢子虫卵囊，若为阳性结果，染色后在显微镜下就可见卵囊呈桃红色或者红色，呈圆形或者椭圆形，直径4~5um，背景被染成微蓝色，并且在染色深的内部还可以见到4个月牙形的子孢子。
1.4.3 微需氧培养检测空肠弯曲菌 将粪便标本在3 h内接种于SKIRROW培养基，这种培养基是具有高度选择性的，接种完后放入微需氧的产气袋内（5%的氧气、10%的二氧化碳以及85%的氮气），封闭后将其放入42℃的孵箱内进行培养48h。若为阳性结果，在培养基的平板上可形成无色半透明的毛玻璃样的小菌落，并且单个菌落呈中心凸起，周边呈不规则的形状，没有溶血的现象发生，革兰染色会发现空肠弯曲菌菌体弯曲呈逗点状，呈s形或者是螺旋状。
1.4.4金标法来检测难辨梭状芽孢杆菌 采用的是OXOID生产的检测卡，粪便标本采集后3h内进行送检，如果标本不能在规定的时间进行检测的话，就应该放置于2~8℃冰箱内，并且要在72 h内检测。
2 结果
对79份标本进行检测，共有47份标本检测出有病原微生物的感染，阳性率是59.49%（47/79）。其中感染真菌的标本是最多的，具体情况见表1。
3 讨论
我们对79例HIV感染合并慢性腹泻患者粪便标本进行检测，共有47份标本检测出有病原微生物的感染，阳性率是59.49%（47/79）。
47份标本中感染真菌的比率是最高的，占了27.85%，不管是革兰染色涂片还是真菌培养，都显示有真菌的感染。这与王慧珠等人的报道一致[2]，这可能是因为在人体的免疫力正常的情况下，我们人体可以抵抗这些真菌的入侵，但是HIV患者的免疫力发生极度的下降，就会导致真菌的大肆入侵。其次就是隐孢子虫的感染，占了16.46%。隐孢子虫是一种入侵肠道的寄生虫，主要是通过饮用被污染的水或者是在污染的水源里面游泳而吞咽了隐孢子虫而导致的感染。病程多变并且严重，常为水样便，病情持续几周到几个月，甚至是几年，可危及生命。郭杰，何艳群，焦炳欣等人报道了HIV慢性腹泻患者中存在着隐孢子虫感染，中晚期患者随着病情的进展， 特别是随着CD4 +T淋巴细胞水平的降低，感染的危险性明显增高[3]，因此值得临床重视。李敏等[4]人报道的北京地区的2009-2010年的HIV感染合并慢性腹泻患者感染隐孢子虫的比率是5.97%，这是因为卫生习惯以及生活的环境与隐孢子虫的感染率是密切相关的，在北京地区可能对人民普及了相关的知识，而在本地区这方面做的还不够。
表1还表明了感染结核分枝杆菌的有6株，因此在临床上除了注意上述的两种病原微生物的感染外，还应注意结核分枝杆菌。难辨梭状芽孢杆菌可以引起严重的腹泻、伪膜性结肠炎、结肠穿孔，甚至死亡[5],并且可以在医院内进行迅速的传播，随着患者病情的加重，感染难辨梭状芽孢杆菌的比率也会升高。虽然感染空肠弯曲菌和沙门菌的株数分别是2和1，但是也不容临床上忽视。空肠弯曲杆菌是弯曲杆菌属成员之一，属于革兰阴性菌，是近年来国内外广泛重视的人畜共患病原菌[6]，会引起人急性肠炎和食物的中毒，引起腹泻的频率是沙门菌和志贺菌的2~7倍。患有沙门杆菌感染的患者有严重的腹泻症状。
由此可见，真菌、隐孢子虫、分枝杆菌和难辨梭状芽孢杆菌是HIV感染合并慢性腹泻患者感染的主要病原菌，值得临床医生找出原因，并且积极的给予治疗。
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参考文献]
[1] 魏文甫.17 例艾滋病患者的消化道表现与临床分析[J].中国中医药咨讯,2010,2(31):193.
[2] 王慧珠，华文浩，李敏. 253 例 HIV 感染合并慢性腹泻患者粪便标本的病原微生物检测分析[J]. 中华实验和临床感染病杂志（电子版），2012,6(2):135-138.
[3] 郭杰,何艳群,焦炳欣.HIV/AIDS 慢性腹泻患者149 例隐孢子虫感染分析[J]. 中国皮肤性病学杂志，2011,25(11):868-870.
[4] 李敏,刘颖,王慧珠，等. 艾滋病慢性腹泻患者隐孢子虫及病原菌感染调查[J].中国公共卫生,2012,28(8):1099-1101.
[5] Kelly CP,LaMont JT. Clostridium difficile- more difficult than ever．N Enql J Med,2008, 359(18):1932-1940.
[6] 陈杰,孙新婷,曾争，等.急性空肠弯曲菌肠炎的临床特征及耐药性分析.传染病信息,2011, 24(1): 21-25
（收稿日期：2013-10-08）