廖银花1 邓石军2 胡玉林1
1.郴州市第一人民医院病理诊断中心，河南郴州 423000 ;2.郴州市第四人民医院儿科，河南郴州 423000
[摘要] 目的 本文旨在探讨miR-124在胶质瘤组织中的表达及临床意义。方法 收集2010年8月—2013年5月胶质瘤患者手术切除标本45例，脑外伤或尸检脑组织共12例作为正常对照，运用原位杂交技术检测胶质瘤组织及正常脑组织中miR-124的表达水平，分析其与胶质瘤临床参数的关系。结果 原位杂交检测显示，在45例胶质瘤组织中miR-124阳性表达率为28.9%（13/45例），对照组阳性表达率为75.0%（9/12例），差异有统计学意义，并且miR-124的表达随着胶质瘤患者临床分期进展而降低。结论 miR-124可能成为胶质瘤患者病情进展预测的潜在生物学标志。
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关键词 ] miRNA；miR-124；胶质瘤；临床意义
[中图分类号] R739.4 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2014）02（c）-0010-02
Expression and clinical significance of miR-124 in tissues of gliomas
LIAO Yinhua1 DENG Shijun2 HU Yulin1
1.Pathological diagnosis center of Chenzhou No.1 People’s Hospital, Hunan 423000, China；2.Department of paediatrics of Chenzhou No.4 People’s Hospital, Hunan 423000, China
[Abstract] Objetive To investigate the expression and clinical significance of miR-124 in glioma tissues. Methods 45 glioma tissue specimens and 12 brain samples from trauma or autopsy were collected from Aug 2010 to May 2013. Hybridization in situ was performed to test the expression of miR-124. Results The positive expression rate of miR-124 was 28.9% in glioma tissues and 75.0% in normal brain tissues. The downregulation of miR-124 expression was associated with the progression of clinical stage. Conclusion MiR-124 could be regarded as a potential biomarker in predicting the progression in glioma.
[Key words] miRNA；miR-124；Glioma；Elinical significance
胶质瘤是最常见的成人原发性脑肿瘤。根据世界卫生组织分类，胶质瘤可以分为：毛细胞型星形细胞瘤、弥漫型星形细胞瘤、间变型星形细胞瘤和多形性胶质母细胞瘤等四类，根据级别可以分为：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级。其中，间变型星形细胞瘤和多形性胶质母细胞瘤，即WHO Ⅲ、Ⅳ级被认为是恶性胶质瘤。恶性胶质瘤患者的平均生存期为15个月。目前，对于胶质瘤的治疗以手术为主，辅以放疗、化疗和生物治疗，但是收效甚微[1]。因此，明确胶质瘤的发病机制及病情进展机制有着非常重要的意义。
近来的研究表明，许多微小RNA（microRNA，miRNA）在胶质瘤的发生发展中发挥非常重要的作用。miRNA是一类18~23个核苷酸长，内源性表达的短非编码RNA。通过靶向基因的3’非翻译区，抑制翻译或者降解mRNA，从而调控基因的表达。大量研究表明，miRNA参与细胞凋亡、分化、中枢神经发育及干细胞分化等生物学过程[2]。研究表明，miR-124在成人中枢神经系统，特别是神经元的分化和成熟过程中发挥重要作用[3]。本文通过研究miR-124在胶质瘤中的表达分析其在胶质瘤中的临床意义。
1材料与方法
1.1材料
收集我院2010年8月—2013年5月间胶质瘤切除标本45例，患者术前均未接受放化疗。12例正常脑组织来源于脑外伤患者和尸检。按照WHO胶质瘤组织学分类及分级标准进行分级分期。
1.2试剂
地高辛标记的miR-124原位杂交探针（Exiqon公司），原位杂交试剂盒为武汉博士德公司产品，DAB显色试剂盒购于北京中杉金桥公司。
1.3原位杂交检测
切片脱蜡至水，PBS洗3次，3%柠檬酸稀释的胃蛋白酶消化15 min，PBS洗3次，1%多聚甲醛固定10 min，DEPC水洗3次，56 ℃预杂交液预杂交4 h。miR-124探针1:250稀释，56 ℃杂交过夜，室温封闭30 min。生物素化鼠抗地高辛室温孵育2 h，PBS洗4次，DAB显色，苏木素染，梯度脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。
1.4原位杂交结果判断
miR-124表达的阳性染色均为棕黄色颗粒，位于细胞浆内，结合染色强度和范围标准如下：光镜下观察阳性染色的细胞比例（5个高倍视野下的均数) 分为：①阴性，阳性细胞数少于10%；②阳性，阳性细胞数在10%～50%之间；③强阳性，阳性细胞数多于50%。
1.5统计学处理
应用SPSS 13.0统计软件进行分析，率的比较采用卡方检验，组间比较用方差分析，当P<0.05时，为差异有统计学意义。
2 结果
2.1miR-124在胶质瘤组织与正常脑组织中的表达
原位杂交结果显示，45例胶质瘤组织中miR-124阳性表达13例，阴性表达32例，阳性率为28.9%；12例正常脑组织中miR-124阴性表达3例，阳性表达9例，阳性率为75.0%，差异有统计学意义（P<0.01），见表1。
2.2胶质瘤组织中miR-124表达与临床参数的关系
原位杂交技术检测结果表明，miR-124的表达与胶质瘤患者的性别、年龄无关系，差异无统计学意义（P>0.05）。miR-124在低级别胶质瘤（WHOⅠ级和Ⅱ级）中的表达阳性率高于高级别胶质瘤（WHOⅢ级和Ⅳ级），说明miR-124的表达随着胶质瘤WHO分级进展而下调，差异有统计学意义（P<0.01）（见表2）。
3 讨论
彭娟等[4]研究发现，miR-124基因高度保守，其家族成员的成熟序列相似性高达89.54%，其靶基因参与细胞运输、信号转导、转录调控等重要生命过程。多项研究表明，miR-124在多种肿瘤中表达下降，如果增加miR-124的表达能发挥抑制肿瘤的功能。转染miR-124至人成骨肉瘤细胞MG-63，能抑制细胞增殖[5]。此外，研究者利用荧光素酶报告分析证实miR-124可通过直接抑制DNMT3B的表达抑制胃癌MKN-45细胞增殖能力[6]。在髓母细胞瘤中，miR-124表达下降，增加其表达能抑制SLC16A1的表达，从而抑制肿瘤的增殖和生长[7]。
本文利用原位杂交技术检测了胶质瘤组织和正常脑组织中miR-124的表达，结果与国内外的研究miR-124在恶性肿瘤中表达下降一致，miR-124在胶质瘤中的表达下调。通过统计分析发现，miR-124的表达下调与患者的性别、年龄无关，但是随着胶质瘤患者WHO分级的增加，miR-124的表达阳性率更低，这说明，miR-124表达的下降或缺失与胶质瘤分级密切相关，其可能在胶质瘤病情进展中发挥重要作用，有成为预测胶质瘤病情进展分子标记物的潜在可能。
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参考文献]
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[3] Wilting SM, van Boerdonk RA, Henken FE, et al. Methylation-mediated silencing and tumour suppressive function of hsa-miR-124 in cervical cancer[J]. Mol Cancer，2010（9）:167.
[4] 彭娟, 李思光, 罗丹丹, 等. miR-124基因家族的分子进化与靶基因预测[J].生物技术通报，2011（10）:167-178.
[5] 唐志斌, 廖瑛. miR-124对人成骨肉瘤MG-63细胞生长增殖的影响[J].亚太传统医药，2012,8(2):7-8.
[6] 谢黎明, 贺荣芳, 张志伟, 等. miR-124通过靶向调控DNMT3B抑制胃癌细胞增殖[J].中南医学科学杂志，2013,41(1):10-12.
[7] Li KK, Pang JC, Ching AK, et al. miR-124 is frequently down-regulated in medulloblastoma and is a negative regulator of SLC16A1[J].Hum Pathol，2009，40(9):1234-1243.
（收稿日期：2013-11-20）