聂云天1 沈 雷2 何 军2 孙 权2△
1.齐齐哈尔医学院2012级临床专业，黑龙江齐齐哈尔 161006; 2.齐齐哈尔医学院解剖教研室,黑龙江齐齐哈尔 161006
[摘要] 目的 研究水蛭提取液对实验性上皮组织炎症具有抗炎作用。方法 对30只昆明小白鼠进行全层皮肤缺损处理，利用金黄色葡萄球菌建立皮肤炎症模型，以涂抹水蛭提取液为A组，涂抹红霉素为B组、涂抹凡士林为C组，分别记录相应药物涂抹前后的红肿的高度、面积，结痂的面积数值，将数值进行对比与统计学分析。结果 水蛭提取液A组在红肿高度平均下降0.32mm，面积平均减小5.73 mm消炎程度方面与红霉素B组相比抗炎能相仿；A组与凡士林C组相互比较，A组抗炎效果明显(P<0.05)，具有显著性差异。结论 水蛭提取液对大鼠实验性上皮组织炎症具有抗炎作用。
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关键词 ] 水蛭提取液；金黄色葡萄菌；炎症模型
[中图分类号] R3 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2014）03（c）-0024-03
Leech extract on experimental anti-inflammatory epithelial tissue inflammation Preliminary Study
NEI Yuntian1 SHEN Lei2 HE Jun2 SUN Quan2
1.Qiqihar Medical College, Department of Anatomy， Qiqihar 161006, China 2.Department of anatomg Qiqihar Medical School 161006, China
[Astract] Objective To study the leech extract on experimental epithelial tissue inflammation has anti-inflammatory effect.Methods The 30 full-thickness skin defect of kunming mice, and skin inflammation model was established based on staphylococcus aureus and to apply leech extract for group A, daub erythromycin for group B, smearing vaseline for group C, were recorded before and after the corresponding drug daub the height of the red and swollen, area, numerical scabby area, compare the numerical and statistical analysis.Results The leech extract swelling height in group A drop of 0.32 mm, size 5.73 mm quared antiphlogistic the extent compared with erythromycin group B similar anti-inflammatory can; Group A compared with vaseline group C, group A anti-inflammatory effect is obvious(P<0.05), with significant difference.Conclusion Hirudo extract on experimental epithelial tissue inflammation has anti-inflammatory effect.
[Key words] Leech extract ;Staphylococcus aureus;Inflammation model
皮肤是复层扁平上皮组织附着在人体的表面，起到免疫、保护等作用，当皮肤受到烧烫伤、外力挫伤、真菌、细菌感染等致病因素就会发生相应的炎症反应。目前临床治疗皮肤炎症有两种方法：抗生素治疗或者使用激素类药物。长期使用抗生素类药物治疗皮炎，可以导致细菌会产生耐药性[1-2]；长期使用激素类药物治疗皮炎时会减少中性粒细胞的趋化作用，同时还能降低Langerhans cell的功能，从而使皮肤局部免疫功能下降；使皮肤屏障功能受损，造成皮肤对激素产生依赖[3]。对于治疗皮肤炎症应该寻求更加安全有效的办法，本实验探究水蛭提取液对实验性上皮组织炎症的抗炎作用，为治疗皮肤炎症奠定研究基础，开辟新的治疗思路。
1 材料与方法
1.1 材料
20g宽体金线蛭（江苏峰瑞达股份有限公司）；30只重量20~22g，雄性，年龄1岁，生理情况各项都正常，健康状况良好的昆明小白鼠（齐齐哈尔医学院动物实验中心）；金黄色葡萄球菌，菌号[ATCC29213]（南京便诊生物科技有限公司）；分析纯级聚乙二醇（益康药业有限公司）；医用红霉素软膏（重庆科瑞制药有限公司），金黄色葡萄球菌检测试纸（广州健仑生物科技有限公司）。
1.2 方法
1.2.1 药品处理 将金黄色葡萄球菌配置成浓度为9×103CFu/mL的细菌溶液备用，取20g宽体金线蛭研磨成粉状，用200 mL聚乙二醇进行有效成分萃取[4],配置成水蛭聚乙二醇溶液含水蛭有效成分浓度为10%[5]。将萃取好的溶液进行常温静置备用。
1.2.2 皮肤感染模型 小鼠背部正中线处备皮，消毒。无菌手术剪刀行5.0mm×5.0mm“□”全层皮肤缺损处理[6]，无菌棉签蘸取浓度为9×103CFu/mL的金黄色葡萄球菌涂抹昆明小白鼠伤口[7] ，术后小鼠放置在无菌环境，2 h后伤口出现炎症，用金黄色葡萄球菌检测试纸对伤口组织进行检测，发现试纸检测呈阳性，证明此感染为金黄色葡萄球菌造成[8]。
1.2.3 实验分组 30只昆明小鼠伤口感染模型，随机分为A、B、C3组，每组10只。其中，A、B、C三组均为雄性，且年龄1岁，伤口情况相差无异且三组小白鼠平均体重分别为205、210、215g,差异不明显，无统计学意义，具有可比性。小白鼠A组为水蛭提取液组：无菌棉签蘸取浓度为10%的水蛭聚乙二醇溶液对小白鼠伤口表面进行均匀涂抹，面积为36mm2；B组为阳性对照组，伤口用红霉素软膏涂抹[9],红霉素软膏涂抹量为1mm2，以覆盖伤口破溃表面形成薄膜为准[10]。C组为阴性对照组，小鼠伤口用凡士林涂抹,凡士林涂抹量以覆盖破溃表面形成薄膜为准[11]。
1.2.4 观察指标 自进行药物涂抹后间隔2 h观察一次，最终8 h后观察各组情况并记录数据。以红肿的高度，红肿的面积，结痂的面积数值为参照依据。
1.2.5 统计方法 应用SPSS 19.0进行处理计量资料以均数±标准差（x±s）表示，多组间的比较采用方差分析。
2 结果
各组在治疗前后红肿高度、面积、结痂面积比较如表1、表2所示。
3 讨论
水蛭在中医里面是一味传统的中药，水蛭始载于《神农本草经》：“主逐恶血,瘀血,月闭,破血瘕积聚,无子,利水道。”其味咸、苦,性平,归肝经,具有破血通经、逐瘀消癥之功,主治血瘀经闭、癥瘕痞块、中风偏瘫、跌打损伤等[12]。现代医学研究证明水蛭含有多肽类、肝素、抗血栓素、氨基酸以及镇痛酶、抗炎酶和溶血酶等主要成分,其中分离出的活性成分可分为两大类:一类是直接作用于凝血系统的成分,包括凝血酶抑制剂,以及其它抑制血液凝固的物质,如水蛭素(Hirudin)、菲牛蛭素(Bufrudin)、森林山蛭素(HaenBdin)等[13];第二类是其它蛋白酶抑制剂及其它活性成分,如溶纤素(Hementerin)、待可森(Decorsin)、抗炎酶等其中抗炎酶是是水蛭提取液能具有产生抗炎作用的原因[14]。水蛭还具有抗凝、抗栓、改善血流变学、抗炎、抗肿瘤、降血脂等作用[15]; 李明等人在水蛭临床研究综述液也总结出水蛭以及提取液有广泛的临床要用价值，在水蛭抗炎方面有很大的探究研究空间[16]。
在本研究的动物炎症模型中采用的是金黄色葡萄球菌,此细菌感染皮肤之后炎症反应明显，便于观察[17]。从实验结果中看出有显著性差异且P<0.05。实验组A与对照组B相互比较，红肿高度均有所下降，红肿的面积均有所减小，且红肿高度下降与红肿面积减小幅度相当，水蛭提取液与红霉素软膏抗炎能力相仿。将实验组A的结果与对照组C相互比较，对照组C红肿的高度与红肿的面积均没有明显变化，而实验组A的红肿高度与红肿面积都有所下降，水蛭提取液与凡士林相对比显示了水蛭提取液对小鼠皮肤炎症具有一定的抗炎的作用，究其原因，可能与以下原因有关。
①水蛭提取液含有抗炎酶，是产生抗炎作用的主要原因[18]，当水蛭提取液涂抹在伤口处时会改善伤口皮肤下层组织的通透性，改善伤口的营养供应，曾强伤口的免疫能力，达到快速抗炎的作用。②水蛭提取液涂抹后还可以改善伤口皮肤下层的血液流变，增加对炎症伤口皮肤的血液供应，释放大量白细胞、浆细胞、IL-6、IL-8等抗炎细胞或因子，从而产生抗炎作用。③水蛭提取液的抗炎酶可以降解细菌的细胞壁，改变细菌等致病生物细胞的通透性，阻止细菌细胞之间的信号传递，抑制细菌等对营养物质的吸收，从而达到灭菌抗炎的作用。④水蛭提取液的其他抗炎成分可以抑制细菌内部DNA复制，阻止细菌的增殖，从而达到灭菌抗炎的作用。此外，水蛭提取液附着在伤口表面，形成膜化作用，保护皮肤伤口不被其他致病因素的侵袭。
通过本实验发现，水蛭提取液的确可以在皮肤炎症中发挥抗炎的重要作用，但是具体机制还有待深入探索，以便为治疗皮肤炎症发挥积极作用。
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（收稿日期：2014-02-10）