李 岩1 王 彤2 赵俊华1
1.吉林省白城市食品药品检验所，吉林白城 137000：2. 吉林省白城市实验高级中学，吉林白城 137000
[摘要]目的 建立五味子丸中五味子醇甲的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法 谱柱Agilent C18，流动相：甲醇：水（65：35）；检测波长：250 nm。柱温：30 ℃，流速：1.0 mL/min结果 五味子醇甲在0.1076~1.614 μg范围内，线性良好（r=0.999 8）。平均加样回收率为99.6%，RSD%=0.2%。结论 本方法简便准确，重复性好，可用来控制五味子丸的质量。
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关键词 ]五味子醇甲；五味子丸；高效液相色谱法。
[中图分类号]R19[文献标识码]A[文章编号]1672-5654（2015）02（c）-0066-03
HPLC Determination of the Content of Fructus Schisandrae Alcohol Armour in Fructus Schisandrae Pill
LI Yan1 WANG Tong2 ZAO Junhua1
1.Baicheng Institute for food and drug control， Baicheng，Jilin Province，137000，China；2. The Experimental High School of Baicheng City， Baicheng，Jilin Province，137000，China
[Abstract]Objective to establish determination method of the content of fructus schisandrae alcohol armour in fructus schisandrae pill.Methods using HPLC spectrum of Agilent using C18 column， mobile phase： methanol： water （65：35）. ： detection wavelength 250 nm. Column temperature： 30 ℃，velocity：1.0 ml/min.Results fructus schisandrae alcohol armour， within the scope of 0.1076-1.614 mu g， good linear （r=0.9998）[1].the average sample recovery rate was 99.6%， RSD % = 0.2%.Conclusion this method is simple and accurate， and reproducible， can be used to control the quality of the fruit of Chinese magnoliavine pill.
[Key words]Fructus schisandrae alcohol armour； Fructus schisandrae pill； High performance liquid chromatography.
[作者简介]李岩（1981.11-），男，吉林白城人，本科，主管药师，从事10多年的药品检验工作，现主要从事药品检验及综合性规范的制定工作。
五味子丸由五味子、肉苁蓉（酒制）、茯苓、菟丝子（酒炒）、车前子（盐制）、巴戟天（制）中药组成，滋补阴气，填精益髓。用于肾气不足，腰膝疼痛，记忆衰退，头晕耳鸣，四肢无力。原质量标准[1]中不含含量测定项五味子醇甲，为了控制五味子丸的质量，研究设立了高效液相色谱法（Hplc）测定五味子丸中五味子的有效成分五味子醇甲的含量，此方法操作很简单，数据比较稳定，结果很准确。
1 材料与仪器
1.1 材料 五味子丸批号：20141012、20141013、20141014；五味子丸阴性对照药材（亳州光大药业股份有限公司）；对照品：五味子醇甲（中国药品生物制品检定所，批号11548-20140203共含量测定用）；含量测定所用的甲醇为青岛试剂厂生产的色谱纯，其它试剂均为分析纯。
1.2 使用的仪器 Agilent高效液相色谱仪；工作站为Sepμ 3000色谱：岛津uv-2600紫外可见分光光度计。
2 实验方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：AgilentC18色谱柱（4.6×250 mm，5 μm）；柱温30 ℃。流速：1.0 mL/min、流动相：甲醇：水（55：45）；检测波长：250 nm。理论板数按五味子醇甲峰计算不得低于3 500。[2，7]
2.2 对照品溶液的配置
精密称取对照品五味子醇甲适量加甲醇使溶解，制成每１mL含50 μg 的五味子醇甲对照品溶液。
2.3 供试品溶液的配置
取重量差异项下的本品5 g，精密称定加甲醇50 mL加热回流1 h，加甲醇补足减失总量。滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇10 mL使溶解，置25 mL棕色容量瓶中，再加甲醇稀释至刻度，作为供试品溶液。
2.4 阴性对照试验及检测波长的确定
按照五味子丸的处方制备方法配置缺少五味子药材的模拟样品。按照处理供试品溶液的方法制成五味子阴性对照溶液。将五味子阴性对照溶液、五味子供试品溶液及五味子醇甲对照品溶液分别注入液相色谱仪器中再进行检测。岛津uv-2600紫外可见分光光度计对五味子醇甲进行扫描，经扫描五味子醇甲在紫外光谱区250 nm处有最大吸收，因此选定250 nm为检测波长。五味子丸供试品中五味子醇甲的光谱吸收图标显示，供试品的最大吸收波长与对照品完全一致，而五味子阴性对照定光谱吸收在与五味子醇甲峰相同的保留时间处没有吸收峰。因此说明配方中的其它药品五味子醇甲的检测无扰，见图 1 。
2.5 线性关系考察
分别精密吸取50 μg/mL的五味子醇甲对照品溶液2.0，5.0，10.0，15.0，20.0，30.0 μL，注入高效液相色谱仪（Hplc）中，按照上述条件测定吸收峰面积，纵坐标设为峰面积积分值，横坐标设为对照品的进样量（μg），绘制出标准曲线，得到五味子醇甲回归方程Y=3.657 1×106X+6 782r=0.999 8，可见，五味子醇甲在0.107 6~1.614μg 范围内呈现良好的线性关系。
2.6 药物稳定性的试验
精密吸取同一份供试液，依次在0，3，6，12，24 h进行测定，共考察24 h。五味子醇甲峰面积平均的RSD为0.85%，说明五味子醇甲至少在24 h内比较稳定，能满足测试要求。
2.7 精密度试验
精密吸取同一份供试品溶液10μL，连续重复进样9次，测定吸收峰面积，结果供试品中五味子醇甲的评均含量0.062mg/g，RSD为1.0%（n=9）。表明精密度良好。
2.8 系统重复性试验
取对同一批量的样品按以上叙述含量测定方法连续进行9次平行试验测定，计算其含量，结果供试品中五味子醇甲的平均含量为0.062 mg/g，相对标准偏差为为1.0%（n=9）。
2.9 方法回收率试验
精密称取已知明确含量的供试品5份，每份为5g，分别精密注入五味子醇甲对照液（50 μg/mL）2 mL，按上述试验方法进行测定，计算其回收率，结果见表1。
2.10 样品测定结果
按照前述方法配置供试品溶液与对照品溶液，分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，测定计算其含量，样品测定的结果见表2。
3 讨论
《中西新药转正》15册[1]，卫生部药品标准《中药成方制剂》[S]第一册[2]，五味子丸均没有对五味子醇甲的含量进行测定。国家食品药品监督管理局，《中成药地方标准上升国家标准部分》内科[S]2005：9-13[2]对五味子醇甲进行了薄层色谱鉴别，但无含量测定。《中西新药转正》15册五味子丸[2]，中有关五味子醇甲的含量测定方法是薄层扫描法，但是薄层扫描法，灵敏度没有高效液相法准确，灵敏。因此我们决定采用高效液相色谱法来测定五味子丸的五味子醇甲的含量。
在供试品溶液的制备过程中， 为了保证样品中五味子醇甲的充分提取， 该实验考察了相关文献[4-19]报道方法后， 采用加入 70%乙醇、 90%甲醇、 100%甲醇超声提取，70%乙醇、 90%甲醇、 100%甲醇回流提取并对不同提取时间进行了试验， 结果表明，70%乙醇、 90%甲醇、 100%甲醇超声提取，提出杂质比较多； 70%乙醇、 90%甲醇，不能完全提取充分，100%甲醇回流1h， 提取效果佳， 故选定此方法。
样品检测中， 曾以不同比例的甲醇-0.1%醋酸，乙腈-水，甲醇- 水-冰醋酸为流动相等度和梯度洗脱， 结果表明，以甲醇-0.1%醋酸，乙腈-水，甲醇- 水-冰醋酸洗脱时分离效果均不好，而《中华人民共和国药典》2010年版五味子项下测定五味子醇甲以甲醇-水（65：35）为流动相，测定时发现样品分离度差，经反复实验，选定甲醇-水（55：45）作为流动性进行测定，结果显示供试品溶液峰形较好，五味子醇甲能够达到基线分离，理论板数按五味子醇甲峰计算不得低于3500。故最终采用此流动相[5-19]。
该实验是对五味子丸的质量标准进一步提高，原标准无含量测定，现选择增加五味子醇甲的含量测定，可以在质量标准对五味子药材的来源质量进行控制，从而达到对产品的质量进行更好的监控。
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