[摘要]血必净注射剂（Xuebijing injection,XBJJ）临床疗效显著，安全性较高，但对其不良反应近年来也有所报道。根据XBJJ不良反应文献报道，其临床特点符合I型超敏反应或类过敏反应特征，并且其大多数发生时间为首次用药后30 min内，故推测XBJJ的过敏样反应可能以类过敏反应为主。本文借助小鼠类过敏反应模型，分别选取XBJJ临床最高浓度的0.5,1和2倍浓度进行类过敏反应研究，发现XBJJ在药物浓度高于临床推荐浓度时会诱发小鼠类过敏反应，故本研究认为XBJJ诱发的不良反应以类过敏反应为主，并且给药浓度可能是诱发XBJJ发生不良反应的危险因素。然后本文从合理用药的角度出发，探讨了XBJJ可能引起类过敏反应的影响因素。配制XBJJ到不同浓度后，分别存放10 min,2.5 h,6 h和24 h后，给小鼠尾静脉注射。结果表明，与配制后存放10min相比，随着存放时间的延长，相同浓度的XBJJ诱发小鼠类过敏反应的程度加重。为了研究不同注射速度可能对XBJJ诱发小鼠类过敏反应的影响，本试验选取3 s,45 s和90 s 3个推注时间来模拟临床注射速度，结果显示，当XBJJ以3 s注射完时（注射速度达0.083 mL•s-1），其产生的类过敏反应最强。故本研究表明XBJJ配制后存放时间过长和注射速度过快,都会导致其诱发小鼠类过敏反应加重。综上建议，XBJJ临床使用时，应严格按照药品使用说明书推荐的用法，用量，配制浓度，滴注速度，并现用现配，合理用药，则对于提高XBJJ的用药安全性具有积极意义。
[关键词]血必净注射液；不良反应；类过敏反应；合理用药
血必净注射液是以古方血府逐瘀汤为基础，按照现代中医药理论，以红花、赤芍、川芎、丹参、当归为主要原料药制成的中药注射液，具有化瘀解毒，即改善循环，减轻感染等功效。血必净注射液（Xuebijing Injection,XBJJ）是防治因感染、创伤和烧伤等引起的脓毒血症及多器官功能障碍综合征的一线临床用药，是中药注射剂中用于治疗危急重症的代表优势品种[1-4]。在国家卫健委印发的新型冠状病毒肺炎诊疗方案(第七版)中，XBJJ是重型和危重型患者的推荐用药。相关研究表明，XBJJ能够对冠状病毒导致的炎症因子风暴或者炎症反应有抑制作用，对冠状病毒也有一定的抑制作用[5]。
XBJJ疗效显著，临床文献Meta分析认为其安全性良好[6]，上市后的安全性研究发现XBJJ的不良反应发生率基本低于临床使用的1%。为了对不良反应文献梳理发现，XBJJ不良反应主要表现为过敏样变态反应，以皮肤及其附件，呼吸系统和全身性损害表现为主，且大多数发生在用药30min内[7-10]。目前认为XBJJ发生不良反应（ADR）的原因较复杂，但对其具体的性质，特点等尚还缺乏系统研究报道，本研究拟借助小鼠类过敏反应模型[11-12]，对XBJJ是否诱发小鼠类过敏反应进行探究。另外由于中药注射剂不良反应的发生很大程度与不合理用药有关，故本研究从药物浓度，配制后存放时间及注射速度3个方面对XBJJ诱发小鼠类过敏反应的风险进行筛查，进而初步了解临床使用过程中会诱发XBJJ发生类过敏发生的危险因素，以其寻找可靠的不良反应防治手段提高安全性及临床合理用药提供参考。
1试验材料
1.1供试品及试剂
血必净注射液（天津红日药业有限公司，批号：1303171），伊文思蓝（Evans Blue,EB,国药集团化学试剂有限公司，批号：W20110325）和甲酰胺（国药集团化学试剂有限公司，批号：F20120316），0.9%氯化钠注射液（石家庄四药有限公司，批号：120319407）；组胺(国药集团化学试剂有限公司，批号F20090423)。
1.2动物
ICR小鼠，体重23-25g，以上动物均为雄性，SPF级别，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号SCXK（京）2012-0001。动物实验经中国中医科学院中药研究所伦理委员会批准（批准号：20142002）。所有动物于实验前适应性饲养1天，温度20~23℃，相对湿度为40%-70%，12h明暗周期照明。动物自由饮用纯净水，喂饲小鼠颗粒饲料（北京市科奥协力饲料有限公司，批号:20140106）。
1.3仪器
BSA3202s动物天平（德国Sartorius集团）；Varioskan LUX酶标仪（美国Thermo Scientific公司）。
2方法
2.1药物剂量、浓度设置
根据说明书推荐，XBJJ最高给药剂量为100 mL·d-1·人-1(治疗多器官功能失常综合征)，最高用药浓度为0.5mL(注射液)·mL-1（100 mL XBJJ加生理盐水100 mL静脉滴注）。人按平均体重60kg计，则XBJJ的最高给药剂量为1.67mL·kg-1。根据章元沛教授主编的《药理实验》[13]中人和动物间体表面积折算的等效剂量比值，则XBJJ的最大剂量换算成小鼠等效剂量为15.2 mL·kg-1(1.67×9.1)。本研究中用于小鼠的XBJJ注射浓度为0.25(1/4原液)、0.5(1/2原液)和1mL•mL-1(原液)，分别相当于XBJJ临床最高浓度的0.5,1和2倍。由于本试验中XBJJ给药体积为10 mL·kg-1（小鼠），故3个XBJJ组的剂量分别为2.5 mL·kg-1，5 mL·kg-1和10 mL·kg-1，分别相当于XBJJ最高小鼠等效剂量的0.16，0.33和0.66倍。
2.2动物分组及不同浓度XBJJ小鼠类过敏反应评价
采用本实验室建立的小鼠类过敏实验模型[6-7]进行试验。各小鼠根据体重随机分成正常组（0.9%生理盐水阴性对照），组胺组（阳性对照），XBJJ低浓度组，XBJJ中浓度组和XBJJ高浓度组（具体见表2），每组10只动物。给小鼠经尾静脉缓慢推注相应的受试物（0.9%生理盐水、组胺溶液，0.25 mL•mL-1XBJJ组，0.5 mL•mL-1XBJJ组和1 mL•mL-1XBJJ组）10 mL·kg-1；随之静脉注射10 mL·kg-10.8%EB溶液。给药后30 min内，观察动物的一般反应、耳廓蓝染的动物数（耳朵数目）、对耳蓝染面积进行评分(表1)。然后，脱颈椎处死小鼠，沿耳根剪下双耳，剪碎，用甲酰胺溶液室温避光浸泡48 h后，再用200目钢筛网过滤浸泡液，将滤液加入48孔培养板中，用酶标仪(波长610 nm)检测吸光度。并用10g·mL-1伊文思蓝(EB)-甲酰胺溶液作为最高浓度，等差稀释作标准曲线，最后计算样本中EB含量来评价类过敏反应程度。
2.3动物分组及配制后不同存放时间的XBJJ小鼠类过敏反应评价
配制XBJJ到0.5mL•mL-1和开启XBJJ注射液原液（1mL•mL-1）后，分别存放约10min,2.5h,6h和24h后（配制后的注射剂样品均按说明书要求存放于药品阴凉柜中，温度设置20℃，避光干燥），给小鼠尾静脉注射，观察其诱发的类过敏反应。小鼠按体重随机分为16组（具体见表3），每组10只动物。各组注射相应受试物后，进接着静脉注射10 mL·kg-10.8%EB溶液。给药后30min判断各组小鼠类过敏反应程度，具体方法同2.2。
2.4动物分组及XBJJ不同注射速度的小鼠类过敏反应评价
由于XBJJ说明书明确规定其注射时间为30-40分钟，按100mL的药物剂量计算，即每秒钟注射0.04-0.06mL。由于本小鼠模型无法复制临床静脉滴注过程，为了研究不同注射速度可能对XBJJ诱发小鼠类过敏反应的影响，本试验选取3s,45s和90s 3个推注时间来模拟临床注射速度。已知每只小鼠注射XBJJ的总体积平均约为0.25mL（小鼠平均体重约为25g,注射体积为10 mL•kg-1），则注射速度分别为0.083mL•s-1,0.006 mL•s-1和0.003 mL•s-1。小鼠按体重随机分为12组（具体见表4），每组10只动物。各组注射相应受试物后，进接着静脉注射10 mL·kg-10.8%EB溶液。给药后30min判断各组小鼠类过敏反应程度，具体方法同2.2。
2.5统计学分析
采用SPSS 20.0统计软件对试验数据进行分析。EB渗出量数据用x±SD表示，其组间比较采用
ANOVA程序进行方差分析；耳廓蓝染面积评分组间差异比较采用非参数检验，，。以P<0.05为差异有统计学意义。
3结果
3.1血必净注射液致小鼠类过敏反应
与正常组比较，给药剂量为10 mL•kg-1，浓度为1 mL•mL-1的XBJJ组小鼠耳蓝染面积评分明显增高(P<0.01),并且EB渗出也明显高于正常组(P<0.01)；当给药浓度下降至XBJJ最高浓度的等倍，即0.5 mL•mL-1时，与正常组相比，有2只小鼠耳廓发生蓝染，造成耳廓蓝染面积评分比正常组升高(P<0.05)，EB渗出与对照相比没有显著差异；浓度继续减小到临床最高浓度0.5倍时，与正常组相比，所有小鼠均不发生耳廓蓝染反应，即耳廓蓝染面积评分和EB渗出均没有明显改变，见表2。上述试验结果提示XBJJ随着给药浓度的加大，其诱发小鼠类过敏反应风险增加。
3.2配制XBJJ后存放时间对小鼠类过敏反应的影响
从表3可以看出，生理盐水对照组未见假阳性。与正常对照组相比，阳性对照药组胺溶液诱发的小鼠类过敏反应都明显强于对照组（P<0.05）。与配制后10min的组胺组相比，存放2.5h,6h组胺组造成的小鼠耳廓蓝染程度没有显著差异，但存放24h的组胺溶液造成小鼠耳廓蓝染数目和EB渗出量相比配制后10min组胺组都明显减轻（P<0.01，P<0.05），初步分析由于时间延长，组胺作用衰减，所以其造成的类过敏反应程度减轻。与配制和开启后存放10min的XBJJ组相比，随着存放时间的延长，相同浓度的XBJJ诱发小鼠类过敏反应的程度加重，即配药后存放2.5、6 h和24h XBJJ诱发小鼠类过敏反应强度（蓝染耳数目和EB渗出量）均明显升高，并具有显著性差异（P<0.05，P<0.01，P<0.01）。结果提示，受试药配制后存放时间越长，其诱发类过敏反应的风险可能越大，建议XBJJ在使用前现用现配。