廖林
（四川省眉山市第二人民医院/四川省眉山市仁寿县人民医院四川眉山620000）
【摘要】
目的： 探索宫颈癌与癌前病变组织中的HPV-16整合感染状态的研究。 方法：对我院2009年1月~2014年12月接受的241例患者的宫颈病变组织的蜡块进行研究，宫颈上皮内瘤样病变（CIN）196例，其中CINI122例，CINII44例，CINIII30例；宫颈癌45例，取22例正常宫颈上皮作为对照组，对HPV-16感染标本的病毒整合状态进行测定分析。结果：经检测发现，在正常的宫颈组织、宫颈癌、CINI、CINII、CINIII组织中，HPV-16的阳性检出率分别为4.5%，66.7%，19.7%，34.1%，43.3%，不同组织的HPV-16的阳性检出率均有明显差异（P<0.05），CINIII的HPV-16整合的感染率（38.5%）明显高于CINI、CINII（16.7%，20.2%，P<0.05），宫颈癌的HPV-16整合的感染率（60.0%）明显高于CINI、CINII、CINIII（16.7%，20.2%，38.5%，P<0.05）。 结论：宫颈疾病的病变程度与HPV-16整合感染状态具有正相关的关系，在检测的过程中辅助HPV感染状态的检测能提高对宫颈癌疾病的预测。
教育期刊网 http://www.jyqkw.com
关键词 宫颈癌；整合；人乳头状瘤病毒
【中图分类号】R711.32【文献标识码】B【文章编号】1674-9561（2015）07-0128-02
宫颈癌是具有高致死率的常见恶性肿瘤［1］，对妇女的生存和健康造成严重威胁。人乳头状瘤病毒（human papilloma-virus， HPV）是发生宫颈癌的重要因素，有研究表明单纯的HPV感染并不能导致宫颈癌的发生，DNA整合进入宿主细胞以及持续存在的高危型HPV是细胞变性的主要因素［2］。HPV整合可在不同的DNA开放读码框架处发生，由于其不稳定性，E2基因铰链区成为宿主细胞常见的断裂或缺失部位［3，4］。在本次研究中，通过对E2基因缺失的检测，来判断HPV-16对临床宫颈癌预测的作用和意义。
1材料与方法
1.1一般资料： 对我院2009年1月~2014年12月接受的241例患者的宫颈病变组织的蜡块进行研究，所有的病变组织均得到病理确认，患者年龄为（48.7±15.3）岁，患者均已婚，本次研究均在家属及患者知情的情况下，得到医院伦理会的审核和批准。根据WHO关于女性生殖道肿瘤的分类标准［5］，宫颈上皮内瘤样病变（CIN）196例，其中CINI122例，CINII44例，CINIII30例；宫颈癌45例，取22例正常宫颈上皮作为对照组。患者的病变组织均未进行放射或化疗，对蜡块进行常规切片，HE染色后在显微镜下进行观察分析，确定无大片出血、坏死以及自溶后进行研究。采用美国典型生物物种保藏中心的宫颈癌细胞株SiHa，将病变组织置于10%的胎牛血清的DMEM培养基，在饱和湿度、37℃、5%CO2的条件下进行培养。
1.2方法： 对病变组织切片的DNA进行提取并进行测量，利用Digene公司的HPV检测盒并依照操作步骤对其进行检验。HPV-16的感染：①DNA水平：根据相关文献，HPV引物序列为：下游为5’- TTATGGTTTCTGAGAACAGA-3’，上游为5’-AGAAACCCAGCTGTATCAT- 3’。②蛋白质水平：免疫组化SP法检测切片组织中HV-16的表达。HPV-16整合的确认：通过重叠的PCR扩增HPV-16 E2基因序列间有相互交叉的三个片段来确认病毒的整合。当三个片段不能同时进行阳性扩散时，表明HPV-16 E2基因有缺失，表明HPV-16整合状态。
1.3观察指标： 对HPV-16感染以及整合进行记录分析。
1.4统计学分析： 选择spss18.0进行数据分析，用均数±标准差（±s）的形式表示计量资料，并用t检验进行其检验，用率的形式表示计数资料，并用χ2检验对其进行检验，用秩和检验（Wilcoxon两样本比较法）的方法，对等级资料进行检验，当P<0.05时统计学有意义。
2结果
2.1 HPV的检测与分型：经检测发现，在正常的宫颈组织、宫颈癌、CINI、CINII、CINIII组织中，HPV的阳性检出率分别为13.6%，93.3%，32.8%，54.5%，70.0%，不同组织的HPV的阳性检出率均有明显差异（P<0.05），具体数据见表1。
2.2 HPV-16感染的确定：经检测发现，在正常的宫颈组织、宫颈癌、CINI、CINII、CINIII组织中，HPV-16的阳性检出率分别为4.5%，66.7%，19.7%，34.1%，43.3%，不同组织的HPV-16的阳性检出率均有明显差异（P<0.05），具体数据见表1。
2.3 HPV-16整合的确定：经检测发现，在正常的宫颈组织、宫颈癌、CINI、CINII、CINIII组织中，HPV-16整合的感染率分别为0%，60.0%，16.7%，20.2%，38.5%，CINIII的HPV-16整合的感染率明显高于CINI、CINII（P<0.05），宫颈癌的HPV-16整合的感染率明显高于CINI、CINII、CINIII（P<0.05），具体数据见表1。
3讨论
宫颈癌是临床常见、具有高致死率的恶性肿瘤，对女性健康具有严重的威胁，所以，对宫颈癌的预防和治疗具有非常重要的意义。大量临床资料表明［6］，宫颈癌的发生和HPV的感染存在因果关系，宫颈癌发生的首要危险因素就是HPV感染，在本次研究中，HPV感染率随着宫颈疾病的加重呈现出逐渐增加的趋势，得到了与临床相似的结果。
有研究表明［7］，HPV感染的存在状态与病毒的类型有密切关系，在宫颈病变的组织中HPV-16的存在状态不仅仅是整合状态，有待进行更进一步的研究。在本次研究中，HPV-16整合的感染率达到了60%，并且随着宫颈疾病的加重，HPV-16整合的感染率逐渐增加，表明HPV-16整合是宫颈疾病发生恶性病变的危险因素。并且在后来的随访中发现，HPV的游离感染以及低危HPV的感染在后期患者逐渐好转，而HPV-16整合感染在后期继续存在，进一步表明HPV的整合状态对宫颈癌的病变有预测作用。
近年来，随着宫颈癌和高危HPV关系的确定，细胞学以及HPV DNA联合对宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的检验得到肯定，并应用于临床［8，9］。有研究表明［10］，HPV整合进入宿主细胞的基因组在CIN病变中很少发生，只有在癌变的组织才会出现。在本次研究中，CINI病变整合的发生率就高达16.7%，表明在宫颈癌病变的早期就出现了HPV的整合，并且在整个癌变过程中均有出现，此外，我们还发现，HPV-16整合的存在，宫颈疾病容易恶化，表明整合可能标志着宫颈疾病恶化、HPV持续存在。所以高危HPV状态的检测，对宫颈癌的治疗和预防具有重要意义。
综上所述，宫颈疾病的病变程度与HPV-16整合感染状态具有正相关的关系，在检测的过程中辅助HPV感染状态的检测能提高对宫颈癌疾病的预测。
教育期刊网 http://www.jyqkw.com
参考文献
［1］ 张巧红，陈黎亚，万汝根. 宫颈癌前病变及宫颈癌与高危型HPV-（16，18） DNA关系的探讨［J］. 中国卫生检验杂志，2013，23（1）:156-157.
［2］ 韩会娟. HPV16/18在宫颈癌组织中的表达及其临床意义［J］.江苏医药，2014，40（9）:1052-1054.
［3］ 孙军，胡俊波，陈洪雷，李蓓芸，夏和顺. 不同宫颈组织中PIK3CA、PTEN和p16蛋白表达及其与HPV16/18感染的关系［J］.肿瘤防治研究，2012，39（2）:189-194.
［4］ 王虹，李娜，付琳琳等.HPV16相关宫颈癌细胞系和组织中 E7和 DRR1蛋白的表达［J］.郑州大学学报（医学版），2015，（1）:29-32.
［5］ 魏文斐，苏桂栋，吴兰芳等.宫颈癌与癌前病变组织中HPV-16的整合感染状态［J］.南方医科大学学报，2015，（1）:47-50.
［6］ 宋晓玲，蔡红兵.HPV16-E6-DNA对宫颈癌预后预测价值分析［J］.中华肿瘤防治杂志，2015，22（6）:416-420.
［7］ 连兴刚.HPV E6蛋白与宫颈HPV持续感染及宫颈癌发病的相关性研究［J］.中国妇幼保健，2014，29（14）:2237-2240.
［8］ 劳小斌，刘晓强，邱春嫦等.宫颈癌患者人乳头状瘤病毒16型感染与P53基因表达及临床意义［J］.中华医院感染学杂志，2013，23（24）:5918-5920.
［9］张文娟，张庆玲，亓云芳.宫颈癌患者感染HPV16E6基因突变分析［J］. 中国病原生物学杂志，2015，10（4）:339-342+347.
［10］肖莉，万义增，王宝，李黎. 宫颈上皮内瘤变及鳞癌组织中组蛋白去乙酰化酶1的表达及与HPV16/18感染的关系［J］.中国医科大学学报，2015，44（5）:464-467+471.