许 琦
中南大学湘雅医院肿瘤内科，湖南长沙 410008
[摘要] 目的 探讨p53和ki-67蛋白在胃癌中的表达情况与相关意义。方法 选择我院2010年2月—2013年12月收治的胃癌标本40例作为观察组，同期选择正常胃粘膜组织40例作为对照组，两组都进行p53和ki-67蛋白的免疫组化分析。结果观察组的p53蛋白表达阳性率明显低于对照组，而ki-67蛋白表达阳性率高于对照组，同时两组的p53和ki-67蛋白相对表达量对比差异也有统计学意义(P<0.05)。p53在胃癌组织中的表达量随着分化程度的增加相应的降低，ki-67蛋白表达量随着分化程度的增加相应的增加(P<0.05)。结论 p53和ki-67蛋白在胃癌中的表达对于预测其预后有明显意义，对判断肿瘤的恶性程度有重要意义，有望成为临床治疗胃癌的新靶点。
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关键词 ] 胃癌；p53；ki-67；免疫组化
[中图分类号] R735.2 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2014）03（a）-0084-02
胃癌是临床上常见的恶性肿瘤，其发病率一直位居前列，上腹部疼痛、恶心、呕吐、腹胀是胃癌早期最常见临床表现。胃癌的发生是一个多基因、多阶段的发展过程，一些原癌基因激活、细胞增殖或凋亡动力学改变、抑癌基因失活或突变、细胞周期自控性调节紊乱等均与胃癌的发生发展有关[1]。近年来的分子生物学研究表明细胞内存在的癌基因和抑癌基因对细胞的生长发育和终末分化就起着这样的正负调控作用[2]。p53是一种抑癌基因，在正常组织中参与了DNA损伤修复、细胞周期调控、细胞凋亡及抑制血管生成等过程[3]。ki-67蛋白是存在于增殖细胞核中的一种非组蛋白性核蛋白，能准确地反映肿瘤细胞的增殖活性，并与多种肿瘤的发展、转移及预后有关[4]。本文具体研究了p53和ki-67蛋白在胃癌中的表达情况与相关意义，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
收集我院2010年2月—2013年12月收治的胃癌标本40例作为观察组，入选标准：经病理证实均为腺癌。其中男20例，女20例；年龄最小29岁，最大70岁，平均年龄（56.25±2.12）岁；同期选择正常胃粘膜组织40例作为对照组，其中男16例，女14例；年龄最小30岁，最大70岁，平均年龄（56.44±22.15）岁。两组的年龄、性别对比差异无统计学意义(P>0.05)。
1.2 方法
1.2.1 主要实验仪器 显微镜及显微摄像装置；日本Olympus公司
光学显微镜；日本Nikon公司
Sartorius电子天平；德国
可调式微量加样枪；上海
迈新不锈钢压力锅（编号HPC1001，内径18cm）；福州
美的电磁炉（1500w-2700w）；佛山
耐高温塑料切片架(迈新RAK-2001)；福州
1.2.2 主要试剂 鼠抗人Ki67单克隆抗体；R&D Systems公司
鼠抗人P53单克隆抗体；R&D Systems公司
正常山羊血清，中杉金桥公司
3%H2O2去离子水；中杉金桥公司
通用型二抗（KIT-5010）；迈新公司
辣根酶标记链霉卵白素工作液（S-A/HRP）；中杉金桥公司
酶底物显色剂（AEC-0037）；迈新公司
抗体稀释剂（ABD-0030）；迈新公司
水性封片剂（AEC-0038）；迈新公司
苏木素二甲苯、95%乙醇；湖南师大试剂厂
1.2.3 方法 选取上述胃癌及正常胃粘膜组织的组织蜡块，进行p53和ki-67等抗体的免疫组化检测。所有抗体均为MAXIM公司产品，具体步骤参照酶底物显色剂（AEC-0037）说明书进行。在X40视野下观察标本，P53蛋白阳性表达为细胞核呈棕褐色或深棕色颗粒；ki-67抗原阳性表达为细胞核呈棕褐色或深棕色颗粒。
1.3 统计方法
采用SAS9.0软件进行数据对比，率的比较用χ2检验，计量资料采用（x±s）表示，两两比较采用t检验，P<0.05代表差异显著。
2 结果
2.1 p53和ki-67蛋白表达情况
经过观察，观察组的p53蛋白表达阳性率明显低于对照组，而ki-67蛋白表达阳性率高于对照组，同时两组的p53和ki-67蛋白相对表达量对比差异也有统计学意义(P<0.05)。见表1、表2。
2.2 p53和ki-67蛋白表达与胃癌分化程度的关系
对P53、Ki67分别与胃癌分化程度进行相关性分析,结果提示P53的表达与胃癌分化程度呈负相关(r=-0.241,P=0.036) ； Ki67与胃癌分化程度呈正相关(r=0.306,P=0.017)。p53在胃癌组织中的表达量随着分化程度的增加相应的降低，ki-67蛋白表达量随着分化程度的增加相应的增加，对比差异都有统计学意义(P<0.05)。见表3。
3 讨论
胃癌是临床常见的恶性肿瘤之一，其早期诊断、治疗及预后判断一直是困扰医疗界的难题。胃癌的发生发展也是一个多基因、多因素参与的变化过程，尤其是涉及到癌基因的活化和抑癌基因的失活，为此我们就近年来胃癌EMT的分子机制研究能够有利于寻找胃癌诊断的肿瘤标志物和胃癌治疗的分子靶点[5]。我们知道，癌转移能够侵袭更多的组织和功能，最终导致机体崩溃，90%的癌症死亡都是由癌转移造成的。
p53基因属于抑癌基因，在监视基因组的完整性和修复DNA损伤方面起着重要作用，在肿瘤组织中p53基因通过点突变的形式由野生型转变为突变型，随之其编码的p53蛋白的肿瘤抑制功能丧失而诱发癌变。突变型p53是一种癌基因，不但减少对细胞凋亡的控制，还可以促进细胞进入增殖周期，导致细胞的无限增殖。研究显示50%的人类肿瘤显示有p53基因的突变，一般报道阳性率为50%左右[6]。ki-67蛋白随细胞周期不同时相而异，Go期无表达，G1中、晚期出现，S期和G2期逐渐增加，M期达到高峰，M期后迅速降解或丢失抗原决定簇。有学者在浸润性乳腺癌中发现ki-67与肿瘤细胞增殖及侵袭转移密切相关，己被广泛用于反映肿瘤细胞增殖速度和预后。ki-67和其他的肿瘤分子标记物相结合，能较好的反映肿瘤增殖活性、对判断肿瘤的恶性程度、预后和指导肿瘤的术后辅助治疗有着极其重要的意义[7]。本文观察组的p53蛋白表达阳性率明显低于对照组，而ki-67蛋白表达阳性率高于对照组，同时两组的p53和ki-67蛋白相对表达量对比差异也有统计学意义(P<0.05)。p53在胃癌组织中的表达量随着分化程度的降低相应的增加，ki-67蛋白表达量随着分化程度的增加相应的增加，对比差异都有统计学意义(P<0.05)。
总之，p53和ki-67蛋白在胃癌中的表达对于预测其预后有明显意义，对判断肿瘤的恶性程度有重要意义，有望成为临床治疗胃癌的新靶点。
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参考文献]
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[4] 刘春忻． p53，c-erbB-2,nm23 在胃癌组织和转移淋巴结中的表达[J]． 中国老年学杂志，2011，31(15) ：2838-2840．
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(收稿日期：2013-12-25）