赵明彦
济南市济阳县中医院，山东济南 251400
[摘要] 目的 探究肝细胞癌组织检测肿瘤干细胞标记物CD133和CD90的临床表达意义。方法 资料随机选自2011年5月—2013年5月在本院诊治的肝细胞癌进行手术患者肝癌的组织标本38例作研究组，及同一例患者的癌旁组织标本38例作对照组，同时选取良性病患者正常的肝组织38例作参照组。分析三组标本的CD133和CD90的表达情况，及肝癌患者病理特征、预后情况。结果 研究组CD133与CD90临床表达的水平，均比对照组及参照组高；研究组标本中CD133与CD90临床表达和癌组织的分化程度，胆管或静脉癌栓有无的临床病理特征存在明显相关性（P＜0.05）；研究组中CD133与CD90的阳性表达患者的生存率，均明显比阴性患者低（P＜0.05）。结论 肿瘤干细胞标记物CD133与CD90于肝细胞癌组织生长、侵袭及转移中有重要作用，且能够预测肝癌患者预后生存情况，对CD133和CD90的临床表达进行研究，具有一定临床应用价值。
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关键词 ] 肝细胞;癌组织;CD133;CD90;表达
[中图分类号] R735.7 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2014）04（b）-0104-02
肿瘤干细胞指存于机体肿瘤组织内少量具备干细胞的性质群体。能够促使肿瘤产生及发展，同时也属于肿瘤的耐药性、转移及复发原因。本文主要对2011年5月—2013年5月在本院诊治的肝细胞癌进行手术38例患者肝癌组织标本中肿瘤干细胞标记物CD133和CD90的临床表达意义进行分析，报道如下。
1资料与方法
1.1一般资料
资料随机选自2011年5月—2013年5月在本院诊治的肝细胞癌进行手术患者38例，男性32例，女性6例，年龄18~76岁，平均年龄（47±6.97）岁。
1.2诊断标准
诊断标准：所有患者的临床症状均与相关标准中肝癌的诊断标准相符合，且患者没有予以化疗和放疗治疗，手术后有明确性病理诊断[1]。
1.3纳入和排除标准
纳入标准：患者及家属均签署治疗和护理方案的知情同意书；无手术及应用麻醉药物的禁忌症；同意并配合进行手术后随访1~2年。排除标准：严重的心肾脏等疾病；精神和心理疾病；理解和意识不清晰；不配合治疗和护理方案者。
1.4方法
1.4.1标本制备 选取在本院诊治的肝细胞癌进行手术患者肝癌的组织标本38例作研究组，及同一例患者的癌旁组织（肿瘤距离2cm位置的肝组织）标本38例作对照组，同时选取良性病患者正常的肝组织标本38例作参照组。所有的标本均通过浓度40g/L甲醛溶液的固定，并进行石蜡包埋处理。利用组织的芯片仪器把组织制作成1.5mm2每点式组织芯片。
1.4.2试剂选择 实验中试剂选择北京中杉金桥公司生产的PV6000的免疫组织化学试剂盒以及兔抗人的CD133和CD90的多克隆的抗体。
1.4.3检测方法 选择PV6000的免疫组织化学方法进行CD133和CD90临床表达，染色需要严格按说明书中的步骤执行，抗体稀释的浓度均采用1:100，且抗原的修复予以高压方案。所有染色同步进行阳性及阴性的设定便于进行对照。其中阳性的对照选择胚胎肝脏，阴性的对照选择PBS进行一抗的代替。
1.5观察指标
观察并统计分析三组标本的临床表达特性，肝细胞癌组织的病理特征，以及肝癌手术患者预后1~2年的生存情况。
1.6结果判定标准
1.6.1免疫组织化学的染色评分标准 依据SHIMIZNU方法进行染色阳性评分，着色的面积依据着色大于2/3、大于1/3且小于2/3、小于1/3及无着色，分别进行3、2、1、0分的评定；强度依据棕褐色、棕黄色、淡黄色、无色，分别进行3、2、1、0分的评定[2]。
1.6.2 CD133的阳性判定标准 CD133染色阳性为黄色的细颗粒形状，位置定在细胞浆内，临床表达的强度由阳性物质着色的面积及深浅进行判定。两项分数和，大于或等于3分表示阳性。
1.6.3 CD90的阳性判断标准 CD90染色阳性为黄色的细颗粒形状，位置定在细胞核及细胞浆内，临床表达的强度由阳性物质着色的面积及深浅进行判定。两项分数之和，大于或等于3分表示阳性。当肝脏实质、肝癌细胞内均表达出阳性，判定为阳性。
1.7统计学分析
所有数据应用SPSS 17.0软件包完成统计分析，一般资料应用标准差（x±s）完成表示，计量资料应用t完成检验，计数资料应用χ2完成检验，当P＜0.05，表示比较差异具统计学上的意义。
2结果
2.1三组标本中CD133与CD90蛋白的临床表达情况
研究组中的CD133与CD90临床表达的水平，均比对照组及参照组高，差异比较具统计学上的意义（P＜0.05），如表1。
2.2 CD133与CD90临床表达和肝细胞癌病理特征相关性情况
研究组标本中，CD133与CD90临床表达和癌组织的分化程度，胆管或静脉癌栓有无的临床病理特征存在明显相关性（P＜0.05），如表2。
注：P值表示CD133（+）与（-）间差异，以及CD90（+）及（-）间的差异情况。
2.3 CD133与CD90临床表达和肝癌患者预后相关性情况
研究组38例患者预后随访中，其中CD133（+）患者术后随访1年生存16（61.54%）例，CD133（-）患者随访1年生存10（83.33%）例，比较差异具统计学上的意义（P＜0.05）。且CD90（+）患者随访1年生存17（62.96%）例，CD90（-）患者随访1年生存9（81.82%）例，差异比较具统计学上的意义（P＜0.05）。
3讨论
肝癌患者机体内肿瘤的干细胞有自我进行更新及多向分化的潜能，细胞生物学的作用物质基础为细胞的表面蛋白质相关分子，也可称为表面标志物。目前，肿瘤干细胞明确的标志物，包括乳腺癌中为CD44+、CD24-/low及ineage-等。近年来，临床研究表明CD90、CD133可为肿瘤干细胞表面的标志物。
机体组织内CD133属于一类细胞的表明抗原，CD133表达将随细胞分化程度下降。近年来，部分专家认为CD133在肝细胞癌组织表达和患者病理特征与预后生存率可存在相关性，但目前，临床关于CD133在肝细胞癌组织表达、病理特征、预后相关性的研究比较少。机体组织内CD90蛋白，也称为Thy-l抗原，属于细胞的粘附分子相关免疫球蛋白。与细胞因子的释放，细胞的增殖与分化，机体内免疫反应，血管的生成和凋亡等具相关性，但是，明确功能仍然没有完全确定[3]。
本研究表明，研究组CD133与CD90临床表达的水平，均比对照组及参照组高，差异比较具统计学上的意义。研究组标本中，CD133与CD90临床表达和癌组织的分化程度，胆管或静脉癌栓有无的临床病理特征存在明显相关性；研究组患者中CD133与CD90的阳性表达患者预后随访1年的生存率，均比阴性患者低，比较差异具统计学上的意义。
综上所述，肿瘤干细胞标记物CD133与CD90于肝细胞癌组织生长、侵袭及转移中有重要作用，且能够预测肝癌患者预后生存情况，对CD133和CD90的临床表达进行研究，具有一定临床应用价值。
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参考文献]
[1] 吕阳,许戈良,荚卫东,等.干细胞标记物联合血管标记物在肝细胞癌中的表达及临床意义[J].中华普通外科杂志,2012,26(12):467-468.
[2] 郭哲,向邦德,黎乐群,等.肝细胞癌CD133、CD90、EpCAM的表达及临床意义[J].中华肝胆外科杂志,2013,21(8):354-356.
[3] 夏羽佳,余帆,晏维,等.不同转移潜能肝癌细胞株中CD标志物的表达差异及意义[J].胃肠病学和肝病学杂志,2012,29(3):482-483.
（收稿日期：2014-01-10）