廖小英：
广州市番禺区沙湾人民医院广东广州511483
周慧：
广州市番禺区市桥人民医院广东广州511490
全世建：
广东省中医药大学广东广州510405
交泰丸对PCPA大鼠失眠模型镇静催眠的效果研究
廖小英周慧全世建
SEDATION AND HYPNOSIS EFFECT OF JIAOTAI PILLS ON RAT INSOMNIA IN PCPA RAT MODEL
LIAO Xiaoying, ZHOU Hui, QUAN Shijian
【摘要】目的
探讨交泰丸镇静催眠的药效。方法
建立PCPA（对氯苯丙胺酸）大鼠失眠模型，将动物分组，分为模型组、交泰丸高、中、低剂量组及地西泮阳性对照，采用高效液相检测方法，观察交泰丸对失眠模型失眠状态（失眠状态观察什么？）及下丘脑中枢神经递质5－HT及GABA的影响。结果
交泰丸滴丸高、中剂量及地西泮组与模型组相比，大鼠失眠状态及均中枢神经递质5－HT均有显著性差异，但交泰丸高、中剂量组与模型组相比，中枢神经递质GABA无显著性差异。结论交泰丸滴丸具有镇静催眠药效，其作用机理可能与影响中枢神递经质5-HT有关，与中枢神经递质GABA关系不明显，本研究对进一步开发交泰丸具有重要意义。
【关键词】交泰丸高效液相检测方法药效学研究
【Abstract】Objective
To discuss the sedative and hypnotic effect of Jiaotai Pills on insomnia in PCPA rat model. Methods
The PCPA (PCPA acid) rats insomnia model was established, and the rats were divided into the model group, high, middle and low dosage of Jiaotai Pills group, and diazepam positive control group. The high performance liquid detective method was adopted to observe the effect of Jiaotai Pills on rat insomnia and hypothalamus neurotransmitters 5-HT and GABA. Results
Compared with the model group, there existed significant difference in the insomnia state of rats and the central neurotransmitters 5 - HT in the high and middle dosages of Jiaotai Pill group and diazepam group. However, in the comparison of the high and middle dosages of Jiaotai Pill group and the model group, there was no significant difference in GABA in the central nervous system. ConclusionJiaotai Pills has sedative and hypnotic efficacy. Its mechanism may be related to the effects of central neurotransmitter 5-HT. Its relationship with GABA in the central nervous system is not obvious. The research has significant influence on the further development of Jiaotai Pills.
【Key words】 Jiaotai Pill; high-performance liquid chromatography method for detection; pharmacodynamic study
【Author′s address】Shawan People´s Hospital, Panyu District, Guangzhou, Guangdong, 511483, China
doi:10.3969/j.issn.1671-332X.2015.07.013
交泰丸源自明·韩懋《韩氏医通》，名见清·王士雄《四科简要方》。以黄连、肉桂组方，治心肾不交型不寐。黄连大寒大苦，清泄亢盛之心火；肉桂辛甘，大热，引火归源，能助肾中阳气、益命门之火。两药相配，攻补兼施，寒热并用，交通心肾。该方临床疗效确切，目前在临床广泛应用于治疗失眠证及相关疾病。本研究为观察交泰丸镇静催眠的药效,采用PCPA大鼠失眠模型,观察交泰丸对其失眠状态及相关中枢神经递质的影响。
1材料和方法
1.1材料
SPF级SD大鼠60只，体质量180~220g，雌雄各半，分笼饲养，购自广州中医药大学实验动物中心，合格证号：0086745，许可证号：SCXK（粤）2008-0002。交泰丸滴丸由广州中医药大学方剂教研室制作；地西泮（批号：H11020898）。Dionex Summit高效液相色谱仪，Chromeleon色谱工作站，HPI049A电化学检测器，RC5C低温高速离心机，PHS一2C精密酸度计。
1.2模型制备
大鼠于每日上午经腹腔注射PCPA混悬液，每天1次，连续注射2d，对照组腹腔注射相同体积的生理盐水．于第一次腹腔注射26~30 h后，大鼠出现昼夜节律消失，白天夜晚活动不停，而对照组昼夜节律正常，表明模型复制成功。
1.3动物分组与给药
大鼠在室内适应性喂养1周后，随机分为正常组、模型组、交泰丸滴丸高剂量组、中剂量组、低剂量、阳性药物（地西泮）对照组。正常对照组、模型组分别以生理盐水灌胃(0.4 g/kg/d)，每天1次，交泰丸滴丸高、中、低组分别分给以不同浓度的交泰丸液：低剂量（0.45 g/kg）、中剂量（0.9 g/kg）、高剂量（1.8 g/kg）、地西泮组（3 mg/kg）给予地西泮液灌胃，每天一次，共3天。
1.6实验方法大鼠断头处死后迅速取出大脑组织。大脑组织加入0.04 mol/L高氯酸2.4 ml，超声匀浆，冰浴沉淀30 min；4℃ 10 000 g×15 min离心，取上清，以0.75倍体积加入2 molNa2HPO4中和；3 000 g×5 min离心，取上清溶液低温保存。
1.4高效液相法色谱柱Develosil C30-UG-5(150 mm×4.6 mm，5μm，日本Nomura Chemical Co.Ltd)；流动相：磷酸二氢钾溶液(25 mmol/L，内含乙二胺四乙酸二钠0.5 mmol/L，用磷酸调pH 3.4)：乙腈=98.2(体积比)，用前经0.45 μl滤膜真空抽滤，流速1.5 ml/min；玻璃碳工作电极，Ag/AgC1参比电极，检测电位0.6V；柱温30℃，自动进样器温度10℃ 。
1.5统计学方法采用SPSS17.0统计软件进行数据统计。定量资料用均数±标准差（±s）表示， 各组间差异性比较采用单因素方差分析， p＜0.05 为差异具有统计学意义。
2结果
2.1大鼠一般状态每天中午10:00~12:00两个小时的时间段作为观察大鼠状态的时间。模型组完全处于失眠状态，说明失眠模型造模成功。交泰丸高、中剂量组、安定组蹲卧在小平台上，较平静，有眯眼动作，并保持相当长时间，表明大鼠进入失眠状态。
2.2下丘脑中枢神经递质r-氨基丁酸(GABA)、5-羟色胺(5-HT)测定结果
3讨论
5-HT合成抑制剂对氯苯丙氨酸(PCPA)可以通过消除脑内5-HT从而达到致失眠目的，大鼠通常白昼睡眠，夜间活动，用对氯苯丙氨酸(PCPA)注射大鼠腹腔，28～30 h后，大鼠昼夜节律消失，几乎达到完全睡眠结果。以上实验结果表明，与模型组相比，交泰丸滴丸高、中剂量组及地西泮组能显著增加模型大鼠的入睡率，催眠疗效确切。与模型组相比，交泰丸滴丸高、中剂量组及地西泮组均能提高大脑中枢神经递质5-HT的含量，说明交泰丸催眠的作用机制与对中枢神递质5-HT的作用有关。与模型组相比，交泰丸滴丸高、中剂量组对中枢神经递质GABA含量影响无显著差异，地西泮组则有显著差异，说明两者对GABA的作用机理有差异。
中医理论认为失眠多由于心火亢盛，扰动心神或心血亏虚，神失所养所致，临床以清心泻火，镇心安神或滋养心血，养心安神治法为主。现有的安神中药多以滋养心血，养心安神为主，其作用机理也以抑制性中枢神经递质GABA为主。交泰丸由黄连、肉桂两味中药组成，以黄连清心泻火安神为主，以肉桂温肾助阳，引火归源，交通心肾，与传统的安神中药有区别，其催眠作用与中枢神经递质GABA关系不显著，其机理有待进一步探讨。本究对进一步探明中药催眠作用机理有重要意义。
参考文献
［1］吴志涛，曹秋菊.交泰丸加减治疗失眠76例报道.时珍国医国药［J］，2001，12（7）646-647.
［2］张坤瑞，刘耀，高军.交秦丸治疗失眠证149例临床研究［J］.实用中医杂志，1994，10（4）：12-16.
［3］潘新彦.六味地黄丸合交泰丸加味治疗老年失眠症31例［J］.中国现代医生,2012,50(30):76-77.
［4］季旭明，姜静娴.交秦丸不同配伍比例镇静安神作用研究［J］.山东中医药大学学报，2003，27（3）：217-220.
［5］全世建，林杏娥，刘妮.交泰丸的药效学研究［J］.中药材，2006，29（2）：164-166.
［6］苗明三，李新华，等.交泰丸对中枢神经系统的影响［J］.中药药理与临床，1991，7（1）：26-26.