董成霞
山东省济南市济阳县人民医院，山东济南 251400
[摘要] 流式细胞仪被广泛的应用于光学、生物学、流体学和免疫学等领域。其中流式细胞术是其检测的关键性技术，具有灵敏、快速的特点，在细菌的快速检测中得到较为广阔的应用。本文就流式细胞术在环境样品细菌检测、临床细菌检测和趋磁细菌研究中的应用前景进行分析，以促进流式细胞技术的发展和完善。
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关键词 ] 流式细胞术;细菌;快速检测;应用
[中图分类号] R446.5 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2014）04（b）-0194-02
流式细胞术于90年代末期被创建，最初仅用于临床检验和科学研究，由于微生物的粒子或细胞较小，因此在微生物领域应用的较晚。但在近几年来，随着荧光染料的改良和丰富、光学科技的不断完善，以及流式细胞检测仪自身的不断发展进步。在如今，流式细胞术在微生物领域得到较为广泛的应用，尤其是对于细菌学问题的解决具有多参数测量精确，并且迅速的特点。
1流式细胞术在环境样品细菌检测中的应用
以往对环境样品通常应用的方法为平板法，对微生物的多样性和总菌数的深入研究具有严重的制约性，常会给检测结果带来较大的误差，并且其他传统的检测方法，具有操作复杂繁琐的特点。但流式细胞是在环境样品中的推广应用，具有测定精准、制备简单、可快速的对多参数数据进行采集，以及可对多元数据进行分析。如今，流式细胞术已广泛的应用于土壤、水和空气等环境中的微生物研究的重要工具，图1为流式细胞术的样品制备技术。
曾有学者应用荧光原位杂交技术结合流式细胞检测仪对猪谷仓空气和实验室空气中的微生物进行测定。先用液化收集器获取样品，然后用荧光染料染色后，应用流式细胞术辨别样品粉尘杂质中的菌体，并且可通过计数处理，获取细菌总数。流式细胞术还可用以土壤样品的检测，Jean Christophe等学者应用流式细胞术对土壤样品中的微生物进行定量和定性检测。应用溴化乙锭和跟16SrRNA具有互补作用的荧光探针结合光散射参数对菌体的大小进行限定，然后从土壤微生物的粉尘碎片和群落中区分出絮凝剂产生菌检测菌[1]。
另外，还有学者应用该术对水环境进行细胞的快速检测,采用流式细胞术和FISH对新加坡压舱水的肠道菌数、弧菌数、细菌总数和大肠杆菌属进行检测。经检测结果发现，应用不同取样点的压舱水，其检测结果会存在较大的差异，该种现象说明航运业的压舱水的水质情况较为复杂，并且受到多种因素的制约和影响。这些检测实验表明，应用流式细胞术能够进行水质检测和污染监测，在工业不断发展的今天，对于生态文明建设，该监测方法的应用具有极为重大的意义。
2流式细胞术在临床细菌检测中的应用
流式细胞术在最初主要应用为哺乳类动物的检测，在临床上的应用极为少见。但目前在临床中，已得到广泛的应用，并且样品的检测范围也从最初的的真核细胞检测扩展到原核生物的细胞检测中，甚至可对更小的病毒进行检测。具有快速、灵敏的特点，对促进病症的及时确诊具有重要的作用。较为常用，并且效果最佳的是对于菌血症的诊断。在临床检查中，异质性和药敏性极为常见，并且两者间具有紧密的联系，流式细胞术在临床细菌检测中的应用，最初始于对药敏性的检测。
Suller曾应用流式细胞术检测氨苄青霉素、万古霉素和头孢他啶，分别对其金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌的药敏性反应进行检测。其结果表明，应用流式细胞术能够灵敏、快速的对抗生素的抗菌效应进行检测，同时应用细胞氧化活性燃料CTC，可检测出多个不同的细胞亚群，由于不同的细菌亚群对于抗生素敏感性并不相同，因此能够较为直观的反映细胞的异质性[2]。付亮等学者应用临床分离出的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌，结合流式细胞术和确证实验两种方法进行两种药物敏感性的检测。其检测结果表明，流式细胞术和传统的检测结果具有一致性的特征，但更富有客观、自动化和快速的特性，能够联合应用于药敏性的实验研究。流式细胞技术还可获取异质性和药敏性的相关信息，属于有效的检测手段。该技术在临床疾病诊断中的优势，在于其检测结果能够帮助对疾病进行及时的诊断，特别是对于急性病的诊断，具有较大的应用价值。
流式细胞术在临床医学中的应用，还可应用于其他病菌的检测。有学者曾应用结合分支杆菌采用荧光素SYBR Green I和二氧化硅纳米颗粒两种燃料标记后，结合流式细胞术进行检测。其检测的菌浓度可低至3.5×103~3.0×104 个/mL，相对于单纯使用FITC 染色的流式细胞术应用更为明显[3]。此外，据有关实验表明，流式细胞术的临床细菌诊断，并不仅仅是局限于普通的细菌检测，还可用于休眠体的检测，能够在其活化前，对疾病作出诊断，进行尽早的诊断，对于患者的康复具有重要作用。
3流式细胞术在趋磁细菌研究中的应用前景
趋磁细菌于1975年由美国科学家Blakemore首次发现，因为其体内据有较小的次磁小体，受到诸多科学家的关注。在目前，对于趋磁细菌磁小体的合成机理并没有明确的文献指出，在研究中，依然存在较多的问题。其中的关键性问题在于对磁小体合成量的检测，也即磁性的表征，对于优化磁小体的合成培养条件形成了限制，制约磁小体的大量合成[4]。在近几年来，有学者曾应用流式细胞仪对趋磁细菌进行检测应用，但文献较少，并且缺乏深层次的研究。
结合流式细胞仪的应用原理，以及检测微粒时可应用荧光染料标记定量测量的特点，初步推断流式细胞术能够应用于检测趋磁细菌磁小体合成量。因为趋磁细菌结合体的体内合成磁体较小，并且数量不相等，致使胞内粒度的大小直接受到磁小体多寡的影响。根据流式细胞术侧向散射光信息能够表示细胞胞内粒度的具体情况,因此，流式细胞术在未来的发展研究中，应能够用于趋磁细菌磁小体量的检测，但在目前仍未找合适的磁小体荧光探针，所以还有待于进一步的深入研究。此外，流式细胞术还可以应用于趋磁细菌非趋磁标准珠和突变株的检测研究，据有关研究观察发现趋磁细菌的非区磁性的突变体能够自发的形成[5]。但在目前的研究中，流式细胞仪应用于趋磁细菌还存在一定的局限性，需要对其仪器精度的提升深入研究，方能进一步的促进流式细胞术在趋磁细菌中的应用。
4结语
流式细胞术在微生物领域中的应用较广，只要可进行荧光分子标记的微粒和细胞，均可应用流式细胞仪检测。尤其是用以形体较为微小的粒子，具有灵敏度高、迅捷、逐个检测、多参数分析等优点。但由于其前期的应用成本较高，并且在样品处理和荧光染料的选择方面仍然存在一定的局限性，还需进一步的研究。但在现代科技不断进步发展下，流式细胞术会有更为广阔的应用前景。
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参考文献]
[1] 付亮,龙军,袁小澎.流式细胞术快速检测产超广谱β-内酰胺酶细菌的研究[J].广东医学,2011,2(4):181-182.
[2] 徐黎明,任桂萍,尹杰超,等.基于流式细胞术的scFv抗体库筛选技术的建立[J].细胞与分子免疫学杂志,2013,3(1):65-68.
[3] 何子纯,李升锦.流式细胞术检测胞内重组耻垢分枝杆菌的活力研究[J].中国微生态学杂志,2011,3(8):261-262.
[4] 许文芳.CD64、CRP在重症细菌感染中的诊断价值[J].检验医学,2011,1(2):205-206.
[5] 张艳.流式细胞术在微生物检测中的应用[J].医疗装备,2011,3(5):203-204.
（收稿日期：2013-12-28）