周锦业1，丁国昌2,3，何荆洲1，曹光球2,3，李秀玲1，卜朝阳1
（1广西农业科学院花卉研究所，南宁530007；2福建农林大学林学院，福州350001；3福建农林大学药用植物研究所，福州350001）
摘要：为了研究不同光质光强处理对金线莲组培苗生长的影响，采用不同光质LED作为人工光源对漳州金线莲进行继代培养。结果显示：红光处理有利于株高生长，其叶绿素含量、Fv/Fm 和Fv/Fo 值均较小，其中70 μmol/(m2· s)红光处理时金线莲高度达到6.26 cm，但此时其叶绿素a 含量、叶绿素b 含量、叶绿素总量、Fv/Fm 和Fv/Fo 值仅分别为1.19 mg/g、0.55 mg/g、1.73 mg/g、0.572 和1.34；绿光对金线莲各项指标均无促进作用，且不同强度处理之间差异不显著；蓝光处理对金线莲组培苗叶片生长和生物量积累均有促进作用，金线莲叶绿素含量、Fv/Fm 和Fv/Fo 值相对较高，但会抑制株高生长，其中70 μmol/(m2· s)蓝光处理时金线莲鲜重、干重、干重/鲜重、叶绿素a 含量、叶绿素b 含量、叶绿素总量、Fv/Fm 和Fv/Fo 值分别为1.47 g、0.19 g、0.130、1.83 mg/g、0.71 mg/g、2.54 mg/g、0.801 和4.02，但其高度仅为4.56 cm。由此得出，红光有利于植物地上部分生长，但是会造成植株徒长，绿光对植物光合作用影响较小，蓝光对组培苗具有一定的矮化壮苗作用。
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关键词 ：LED；光质；金线莲；组培；叶绿素；叶绿素荧光
中图分类号：S603.8 文献标志码：A 论文编号：cjas14110015
基金项目：广西农业科技成果转化资金项目“野生兰花资源收集及繁育技术示范”（桂科转1346004-45）；广西农业科学院科技成果转化项目“兰科植物新品种繁育产业化示范”（农成转201402）；广西农业科学院基本科研业务专项“广西金线莲种质资源ISSR 分类鉴定与组培苗遗传分析”（桂农科2013YM30）。
第一作者简介：周锦业，男，1987 年出生，安徽明光人，研究实习员，硕士，主要从事园林植物生物技术研究。通信地址：530007 广西南宁市大学东路174号广西农业科学院花卉研究所，Tel：0771-3246421，E-mail：ahzhoujy@163.com。
通讯作者：卜朝阳，女，1966年出生，广西钦州人，研究员，硕士，主要从事观赏植物栽培与繁育技术研究。通信地址：530007 广西南宁市大学东路174号广西农业科学院花卉研究所，Tel：0771-3276924，Email：yangnv@126.com。
收稿日期：2014-11-24，修回日期：2014-12-05。
Effect of Light Quality on the Growth of Tissue Culture Chlorophyll
and Chlorophyll Fluorescence in Anoectochilus roxburghiiZhou Jinye1, Ding Guochang2,3, He Jingzhou2, Cao Guangqiu2,3, Li Xiuling1, Bu Zhaoyang1(1Flower Research Institute of Guangxi Academy of Agricultural Sciences, Nanning 530007, Guangxi, China;2Forestry College, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350001, Fujian, China;3Institute of Medicinal Plant, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350001, Fujian, China)Abstract: To research the effect of different light quality and the light intensity treatment on the growth ofAnoectochilus roxburghii tissue culture seedling, the LED light source was used as an artificial light source forA.roxburghii in Zhangzhou to subculture. The results showed that red light treatment was benefit to the growthof A.roxburghii height, chlorophyll content, Fv/Fm and Fv/Fo values were smaller. Among them, the shoot highof A.roxburghii was up to 6.26 cm under 70 μmol/(m2 ·s) red light, but the chlorophyll a, chlorophyll b, totalcontent of chlorophyll, Fv/Fm and Fv/Fo were only 1.19 mg/g, 0.55 mg/g, 1.73 mg/g, 0.572 and 1.34; the effectof green light was not obvious for the indicators of A.roxburghii, and no significant difference between differentintensities; there was a promoting effect on accumulation of biomass and chlorophyll and Fv/Fm and Fv/Fo of A.roxburghii under the blue light treatment, but certain inhibitory effect on plant height, among them. Under theblue light treatment of 70 μmol/(m2 ·s), the chlorophyll a, chlorophyll b, total content of chlorophyll, freshweight, dry weight, the ratio of dry weight to fresh weight, Fv/Fm and Fv/Fo were up to 1.47 g, 0.19 g, 0.130,1.83 mg/g, 0.71 mg/g, 2.54 mg/g, 0.801 and 4.02, respectively, but the shoot high of A.roxburghii was only 4.56 cm.Therefore, the red light was advantageous to the growth of aerial parts of plants, the green light had little impacton plant photosynthesis, and there were certain effect on dwarfed and strong tissue culture seedling under theblue light.
Key words: LED; Light Quality; Anoectochilus roxburghii; Tissue Culture; Chlorophyll; ChlorophyllFluorescence
0 引言
植物组培快繁技术已经日渐成熟，目前研究主要集中于最佳培养基的筛选，对于组培微环境的研究相对欠缺。光是植物组培快繁过程中最重要的环境因子之一，不同光质在植物生长过程中起到的主导作用不同，其中以红光及远红光为主的光敏色素参与植物光形态建成，与此同时植物通过感受外界蓝光信号的变化，改变其生长发育过程（如向光性、抑制茎伸长、激活基因、气孔运动、合成色素等）以适应外界环境的变化[1]。植物受到环境胁迫时其叶绿素含量会产生一定的变化，而叶绿素荧光参数的变化同样可以反映出环境因子变化对植物生长产生的影响[2]。
金线莲(Anoectochilus roxburghii)为兰科开唇兰属多年生草本植物，别名金丝草、金线兰，是集药用与观赏价值于一身的名贵植物品种，一方面金线莲是中国传统名贵中药材，全草入药，具有清热凉血、除湿解毒的功效，对肺结核、糖尿病、膀胱炎和风湿性关节炎等均有显著疗效；另一方面由于其株形优美、叶色独特且叶片具特殊金线网纹结构，因此具有很高的观赏价值[3]。近些年市场对于金线莲的需求量越来越大，人们对于野生资源的无节制采伐已经导致其自然状态下濒临灭绝。组织培养技术是能够在短期内获得大量种苗的有效手段，因此近些年许多专家学者对金线莲组培快繁技术进行了系统的研究，毛碧增等[3]指出金线莲种子细小且胚胎发育不完全，自然状态下极难萌发，因此需通过组培快繁的方式以满足市场种苗需求；伍成厚等[4]利用金线莲种子诱导原球茎的方式生成幼苗，研究表明1/2MS+6-BA1.0 mg/L+NAA1.0 mg/L 为最佳诱导培养基；继而李艳冬等[5]探索金线莲茎诱导最佳方式，得出最优消毒方式、诱导和增殖培养基，同时指出每瓶10 株的接种密度和800 lx 的光照强度培养效果最佳。但研究主要集中于培养基的优化以及栽培方式的创新等，有关金线莲组培微环境的研究相对较少，尤其是组培光源对于金线莲组培苗生长的影响鲜见报道[6]。为此，笔者以不同光质LED 作为人工光源，研究了不同光质光强对金线莲组培苗叶绿素含量及荧光参数的影响，揭示了不同光照对于金线莲组培苗生长影响，为开拓多样化金线莲组培人工光源提供理论保障。
1 材料与方法
1.1 试验地点与材料
试验于2011 年10 月—2012 年1 月在福建农林大学药用植物研究所进行，所选用的材料为福建农林大学药用植物研究所的漳州种源金线莲组培苗，光源采用光强可控的LED光源。
1.2 试验方法
试验共设置9 组光照处理，分别为红光(R)[70、50、30 μmol/(m2· s)]，绿光(G)[70、50、30 μmol/(m2· s)]和蓝光(B)[70、50、30 μmol/(m2· s)]。对照组为28 W三雄极光照明的荧光灯，组培苗接种于继代培养基，每瓶4株，每个处理以3 瓶作为3 次重复，光照周期为12 h/d，继代培养30天后统计相应的测试指标。
1.3 指标测定和数据处理
继代30 天后统计各试验组金线莲组培苗株高、鲜重、干重、干重/鲜重、叶绿素含量和叶绿素荧光参数等，其中叶绿素含量测定采用丙酮和乙醇混合提取法[7]，叶绿素荧光参数采用Handy Fluor Cam荧光成像仪进行测定[8]。试验所的数据通过Excel软件处理分析。
2 结果与分析
2.1 不同光质对金线莲组培苗生长的影响
不同光质光强处理30 天后，分析不同光质对金线莲组培苗生长的结果显示（表1），70 μmol/(m2· s)红光处理株高生长量最大，与对照组相比提高19.92%，不同光强绿光处理其株高生长量与对照相当，而蓝光处理均低于对照组；70 μmol/(m2· s)红光及蓝光处理下，金线莲组培苗的鲜重和干重均高于对照，红蓝光处理时其鲜重与对照相比分别提高17.81%和0.89%，干重与对照相比分别提高4.02%和9.77%，而绿光处理干鲜重值均明显低于对照组。就同一光质不同光强而言，红蓝光处理株高生长量随着光照强度的增加分别表现为逐渐增加和逐渐减小的趋势，而绿光处理规律不明显，其中红蓝光处理时金线莲生长量最大最小值间差异分别为28.81%和2.63%。同一光色不同光强处理时金线莲干鲜重均随着光强增加逐渐增加，红光处理下鲜重和干重最大最小值间差异分别为43.47% 和47.15%，蓝光处理下鲜重和干重最大最小值间差异分别为6.07%和14.37%，绿光处理下变化规律不明显。分析同一光强不同光色间差异，70 μmol/(m2· s)光强时株高生长量大小顺序为R>G>B，50、30 μmol/(m2· s)光强时其顺序均表现为G>R>B；70、50 μmol/(m2· s)光强处理鲜重由大到小依次为R>B>G，30 μmol/(m2· s)光强处理鲜重由大到小依次为B>R>G；3 种光强处理干重变化趋势均为B>R>G。
通过计算不同光质光强处理下干鲜重比值（表1），可以得出不同处理对金线莲组培苗干物质积累率的影响，结果表明，不同光强蓝光处理干鲜重比值均高于对照，其中70 μmol/(m2· s)和50 μmol/(m2· s)光强处理下干鲜重比值相同，与对照相比提高8.33%。就同一光色不同光强处理间干鲜重比值差异性而言，各光色处理随着光强的增加干鲜重比值变化较小，整体体现为高光强处理干鲜重比值要稍大。同一光强不同光色处理间变化趋势一致，金线莲干鲜重比值均表现为B>R>G，高中低光强的红绿蓝处理最大最小值间差异分别为56.63%、58.54%和51.25%。
2.2 不同光质对金线莲组培苗叶绿素含量的影响
不同光质和光强对漳州金线莲组培苗的叶绿素含量具有不同的影响（表2）。不同处理间仅有70 μmol/(m2·s)的蓝光处理时金线莲叶片叶绿素含量高于对照，其中叶绿素a、叶绿素b 和叶绿素总量与对照相比分别提高13.66%、7.58%和11.89%；其余各处理组叶绿素含量均低于对照组。就同一光色不同光强而言，3 种光色处理叶绿素含量均随着光强的增加呈现先减后增的变化趋势，叶绿素含量均在50 μmol/(m2· s)时达到最小值，蓝光和绿光处理70 μmol/(m2· s)光强时叶绿素含量相对较高，而红光处理则是在30 μmol/(m2· s)光强时较高。就同一光强不同光质而言，金线莲叶绿素a、叶绿素b 和叶绿素总量均为蓝光处理时含量最高；其中70 μmol/(m2· s)光强处理时叶绿素含量表现为B>G>R，而50、30 μmol/(m2· s)光强处理时叶绿素含量则表现为B>R>G。
2.3 不同光质对金线莲组培苗叶绿素荧光参数的影响
叶绿素荧光参数的变化可以反映出植物对生长环境因子的变化的适应及耐受能力。不同光质和光强对于金线莲组培苗叶片叶绿素荧光参数变化的影响具有一定差异。初始荧光(Fo)仅在30 μmol/(m2· s)蓝光处理时低于对照组，其余各处理均高于对照组；最大荧光(Fm)则是在70 μmol/(m2· s)红光处理时低于对照，其余各处理均高于对照组，其中以70 μmol/(m2· s)绿光处理时最大；而可变荧光(Fv)为70 μmol/(m2·s)和50 μmol/(m2·s)红光处理时低于对照，其余各处理均高于对照组，其中以30 μmol/(m2· s)绿光处理时最大；Fo 的最小值和Fm、Fv 的最大值与对照相比分别降低或提高5.08% 、43.09%和40.22%。就同一光质不同光强而言，红蓝光处理时的Fo 值、绿光处理时的Fm 值和Fv 值均随着光强的增加先减后增；绿光处理的Fo 值随着光强增加先增后减；红光处理的Fm 和Fv 值随着光强增加逐渐减小；而蓝光处理的Fm和Fv值随着光强增加逐渐增加。就同一光强不同光质而言，蓝光处理时Fo值均最小，而绿光处理时Fm 和Fv 值均最大；其中70 μmol/(m2 · s)和30 μmol/(m2· s)光强时Fo值表现为R>G>B，50μmol/(m2·s)光强处理时的Fo值、30 μmol/(m2· s)光强时的Fm 值以及30 μmol/(m2· s)光强时的Fv 值均表现为G>R>B，其余光强时各参数均表现为G>B>R。
不同光质和光强对金线莲组培苗PSⅡ最大光能转换效率(Fv/Fm)和PSⅡ潜在活性(Fv/Fo)的影响如表3所示。金线莲组培苗在70 μmol/(m2· s)和50 μmol/(m2· s)蓝光处理时Fv/Fm 和Fv/Fo 值均高于对照，其余各处理则均低于对照组；70 μmol/(m2· s)蓝光处理时Fv/Fm 和Fv/Fo 值与对照相比分别提高1.52% 和7.20% ，50 μmol/(m2· s)蓝光处理时Fv/Fm 和Fv/Fo 值与对照相比分别提高4.44%和24.53%。就同一光质不同光强处理而言，红光处理金线莲的Fv/Fm 和Fv/Fo 值均随着光强的增加逐渐减小；绿光处理Fv/Fm 和Fv/Fo 值随着光强的增加先减后增；而蓝光处理时金线莲的Fv/Fm 和Fv/Fo 值则随着光强的增加先增加后减小。就同一光强不同光质而言，金线莲组培苗叶片的PSⅡ最大光能转换效率和PSⅡ潜在活性值均表现为B>G>R。
3 结论与讨论
目前植物组培光源仍以日光灯为主，全光谱照射造成光能的极大浪费，LED 光源具有发热少、能耗低和光色可选等优点，能够针对不同植物合理选择不同光质和光强的人工光源，从而降低组培成本[9]。因此LED 光源已经在多种植物的种苗繁育过程中广泛应用，对相应植物种苗的生长量、产量、观赏效果和药用成分含量等均有不同程度的影响。其中刘建福等[10]研究表明红光、蓝光和红蓝组合LED光照处理均提高了姜黄的姜黄素含量；苏俊等[11]通过对烟草的实验表明，红蓝绿和红蓝白组合LED 光源处理下烟草组培苗的株高、叶长、叶宽、叶面积、茎粗、根数、根长、干重以及植株叶绿素含量与荧光灯相比均有不同程度提高；孙洪助等[12]研究显示红蓝复合光对生菜幼苗的形态建成、根系活力、叶片色素含量和叶绿素荧光均有促进作用；马绍英等[13]研究表明红蓝LED光照处理下葡萄试管苗的增殖倍数、冠鲜质量、根鲜质量、叶面积、叶绿素含量、净光合速率、叶绿荧光参数Fv/Fm 和Fv/Fo 与荧光灯相比均有提高；陈娴等[14]以‘雪韭’和‘紫根红’2 个韭菜品种为研究对象，结果显示红蓝光强比为7:1 时有利于促进韭菜生长，提高其产量。因此研究探索LED 光源在金线莲组培快繁中的应用具有坚实的基础，能够为其提供一套高效、低能耗的人工光源体系。本试验通过测定不同光质处理下金线莲组培苗生长及生物量参数，结果显示，单色红光处理对金线莲株高生长和生物量积累具有促进作用，这与王婷等[15]对不结球白菜的研究结果相同。绿光处理后的金线莲有一定程度的徒长，组培苗生物量及干鲜重比值均较小，整体植株瘦弱，不同光强的绿光处理间金线莲生长和生物量参数差异不大，说明金线莲对不同强度的绿光吸收均较少。蓝光处理的金线莲组培苗株高较低，整体植株健壮，干鲜重值相对较高，叶片面积和数量均较高，表明蓝光对植物有一定的矮化壮苗作用，有利于金线莲植株生物量的积累，这将有助于提高金线莲药用成分含量，这与杨晓建等[16]和孙庆丽等[17]对青蒜及水稻的研究结果相同。
叶绿素含量以及叶绿素荧光参数的变化能够显示植物的生长状况，从而间接地反映出其对外界环境变化的适应能力。通过测定不同光质处理下金线莲组培苗叶绿素含量和荧光参数可知，蓝光处理下叶片叶绿素a、叶绿素b 以及叶绿素总量相对较高，初始荧光值较小，而Fv/Fm 和Fv/Fo 值则较大，表明蓝光处理下金线莲生长状况要优于其他处理，这与刘文科等[18]、赵娟等[19]和石盼盼等[20]的研究相一致。红绿光处理时，其叶片叶绿素含量和荧光参数值均小于蓝光和荧光灯对照处理或与对照值相当，其中绿光处理Fv/Fm 和Fv/Fo值相对稳定，但是70 μmol/(m2· s)光强时的叶绿素含量相对较高，具体原因有待查证，除此之外整体而言不同光强的绿光处理对金线莲组培苗生长状态影响较小，这与张瑞华等[21]和杜洪涛等[22-23]的研究相同；而红光处理时金线莲Fv/Fm 和Fv/Fo 值较低，表明红光处理下金线莲组培苗生长状况较差，其中70 μmol/(m2· s)光强叶绿素含量、Fv/Fm 和Fv/Fo 值最低，但是其对应生长量却最高，表明此时组培苗徒长较严重，幼苗健康状况最差。
综上而言，红光有利于植物的茎伸长生长，但是会在一定程度上造成植物的徒长，单纯的红光处理不利于金线莲组培苗的健康生长；绿光处理整体对金线莲组培苗生长的各项参数均没有促进作用；蓝光照射有利于具有一定的壮苗效果，金线莲植株地上部分节间变短、茎粗壮，并且叶片叶绿素含量、PSⅡ最大光能转换效率和PSⅡ潜在活性均相对较高，但是植株纵向生长速度变慢。因此单色光照均不适合作为金线莲组培人工光源，但是可以考虑通过红蓝混合光源或者周期性交替使用单色光照处理以弥补上述缺点，从而在保证金线莲组培苗质量的同时能够最大限度地提升其增殖率。
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