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富硒罗汉果中罗汉果皂苷V的HPLC测定

  • 投稿刘嘉
  • 更新时间2015-09-22
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陈 薇1,刘庚贵2,段小群1,吴 卫1

(1.桂林医学院,广西 桂林 541004;2.桂林甙元生物科技有限公司,广西 桂林 541001)

摘要:建立富硒罗汉果(Siraitia grosvenorii)果实中罗汉果皂苷V的HPLC测定方法,以Diamonsil C18 (250 mm×4.6 mm, 5 μm)为固定相,乙腈-水(24∶76,V/V)为流动相,检测波长203 nm,流速1.0 mL/min,柱温30 ℃。结果表明,罗汉果皂苷V在0.21~2.10 μg范围内线性关系良好(r=0.999 3),平均回收率为97.64%,RSD为1.66%。该方法可用于富硒罗汉果果实中罗汉果皂苷V含量的测定。

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关键词 :罗汉果(Siraitia grosvenorii);罗汉果皂苷V;高效液相色谱法

中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:0439-8114(2015)02-0444-02

DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.02.048

罗汉果(Siraitia grosvenorii)属葫芦科(Ducurbi taceae),主产于广西,为中国特色植物,在东南亚及欧美地区享有良好声誉,备受人们青睐,被誉为“东方神果”。罗汉果味甘、性凉,具有清热润肺,利咽开音,滑肠通便等功效,常用于治疗肺火咳嗽、咽痛失音、便秘等,药用价值高[1]。富硒罗汉果是近年研制出的罗汉果新品种,除上述功效外,富含硒元素,具备清除体内过量羟基自由基的功效[2],可抗氧化、增强免疫力、抗疲劳等[3,4]。葫芦烷型三萜皂苷类成分罗汉果皂苷V是富硒罗汉果中的主要有效成分[5-8],通过建立富硒罗汉果中罗汉果皂苷V的HPLC分析方法,将有助于控制富硒罗汉果制剂的质量,为开发相关产品提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

富硒罗汉果(产地:广西桂林,桂林亦元生现代生物技术有限公司提供,经桂林医学院生药学教研室品种鉴定为富硒罗汉果);罗汉果皂苷V(批号:20120619,纯度≥98%,上海源叶生物科技有限公司)。

甲醇、乙腈为色谱纯,去离子水等。

1.2 仪器

1100型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司);BS110S型电子分析天平(北京赛多利斯天平有限公司);1810A型电热恒温水浴锅(上海医疗器械五厂);SY-360型超声波提取器(上海宁商超声仪有限公司);MSP-8600型微波消解仪(北京北分瑞利分析仪器公司)。

1.3 方法

1.3.1 色谱分析 以Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm, 5 μm)为色谱柱,以乙腈-水(24∶76)为流动相,检测波长为203 nm,柱温30 ℃,流速1. 0 mL/min,样品过0.22 μm微孔滤膜后,进样10 μL,其理论板数按罗汉果皂苷V峰计算应不低于3 000。

1.3.2 对照品溶液的制备 称取10.5 mg罗汉果皂苷V于50 mL容量瓶中,加甲醇溶解并定容至50 mL,摇匀,得0.21 mg/mL对照品溶液。

1.3.3 供试品溶液的制备 取富硒罗汉果粉末0.5 g,加入甲醇50 mL,加热回流2 h,回收溶剂,减压蒸干,加去离子水10 mL溶解,以AB-8大孔树脂柱纯化,依次以去离子水、20%(V/V)乙醇各100 mL洗脱[7],弃去洗脱液,50%(V/V)乙醇100 mL洗脱,收集洗脱液,挥干,残渣以流动相溶解,定容至10 mL,摇匀待测。

1.3.4 硒的测定 取富硒罗汉果粉末0.5 g于消化管中,加10 mL硝酸、2 mL过氧化氢,摇匀,微波消化后,加水至25 mL,用稀盐酸调至pH 2,加1% (m/v)邻苯二胺2 mL,振摇,放置1 h,加甲苯10 mL萃取,取甲苯液,在340 nm处测定,并计算硒含量。

2 结果与分析

2.1 线性关系的考察

对照品和样品的色谱图见图1。由图1可知,该方法可实现目标化合物的有效分离。取罗汉果皂苷V对照品溶液,分别吸取不同体积(2~20 μL)注入液相色谱仪分析,峰面积(Y)与进样量(X)的线性回归方程为Y=310 662.9X+107.3(r=0.999 3)。结果表明,罗汉果皂苷V进样量在0.21~2.10 μg范围内与峰面积线性关系良好。

2.2 方法学分析

取供试品溶液,重复进样测定6次,罗汉果皂苷V峰面积的RSD为1.12%,说明本方法精密度良好;称取6份样品,各0.5 g,参照上述方法分析,测定样品中罗汉果皂苷V平均含量达10.75 mg/g(RSD=1.37%),表明该方法重现性良好;称取样品0.5 g,参照上述方法制备样品提取液,并于0,1,2,4, 6,12,24 h测定,其峰面积RSD为2.03%,表明提取液中罗汉果皂苷V在24 h内稳定性良好;称取已知罗汉果皂苷V含量为10.75 mg/g的富硒罗汉果样品粉末0.25 g,然后加一定量的罗汉果皂苷V,测定分析,计算回收率为95%~105%,平均回收率97.64%(RSD=1.66%),表明该法准确。

2.3 样品分析

取3批样品(20130921,20131009,20131011),按上述方法分别测定罗汉果皂苷V和硒含量,结果表明,样品中罗汉果皂苷V含量分别为7.61,10.75,

9.33 mg/g,硒含量分别为28.77,31.09,30.56 μg/g,其中罗汉果皂苷V符合2010版药典中对罗汉果含量的要求[9]。

3 讨论

罗汉果皂苷味甜,甜度约为蔗糖的300倍,不含热量,理化性质稳定,易溶于水,作为食品添加剂具有安全无毒的优点,适合长期食用,在国家强制标准《GB2760食品添加剂使用标准》中规定,罗汉果皂苷可不限量用于各类食品,罗汉果皂苷在药品和食品中具有广泛的应用前景[10]。

富硒罗汉果是桂林近年研制栽培出的新品种。通过收集优良栽培品种和野生株系,利用物理和化学方法诱导罗汉果植株染色体加倍、将二倍体大花粉与单倍体卵细胞杂交,培育出有效成分含量大幅提高的无子富硒罗汉果,其中果实中硒元素含量高达30 μg/g左右。目前,富硒罗汉果药用价值的研究尚处于起步阶段,开展相关系统研究,将挖掘其发展潜力,其经济效益和社会效益前景广阔。

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参考文献:

[1] 龙 颖,董 威,王 勤,等.罗汉果新功效的研究现状分析[J].山东医药,2012,52(43):95-97.

[2] 李华为,赵素云,铁 梅.富硒金针菇对羟自由基的清除作用[J]. 食品科学,2010,31(17):18-20.

[3] 夏 星,钟振国,林彩云,等.罗汉果皂苷抗疲劳及耐缺氧作用[J].中国实验方剂学杂志,2012,18(17):198-201.

[4] 肖 刚,王 勤.罗汉果甜苷保肝作用实验研究[J].中国实验方剂学杂志,2013,19(2):196-200.

[5] 胡军影,马双成,程显隆,等.RP-HPLC法测定罗汉果中罗汉果皂苷V的含量[J].药物分析杂志,2008,28(4):544-546.

[6] 陈维军,张俐勤,戚向阳,等.反相高效液相色谱法测定罗汉果皂苷的含量[J].中药材,2005,28(7):559-561.

[7] 周 兢,王梦月,李晓波,等.HPLC法测定罗汉果中罗汉果苷V和11-氧化罗汉果苷V[J].中草药,2007,38(2):196-198.

[8] 欧 莹,陈金月,覃荣灵.HPLC测定罗汉果中罗汉果甜苷V的含量[J].广西中医学院学报,2007,10(4):85-86.

[9] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社,2010.

[10] 唐克军,周迪平,罗 习,等.提取生物活性物质高纯度罗汉果苷V的新工艺[J].企业科技与发展,2012(8):16-18.

(责任编辑 周有祥)