陈 薇１，刘庚贵２，段小群１，吴 卫１
（１．桂林医学院，广西 桂林 ５４１００４；２．桂林甙元生物科技有限公司，广西 桂林 ５４１００１）
摘要：建立富硒罗汉果（Ｓｉｒａｉｔｉａ ｇｒｏｓｖｅｎｏｒｉｉ）果实中罗汉果皂苷Ｖ的ＨＰＬＣ测定方法，以Ｄｉａｍｏｎｓｉｌ Ｃ１８ （２５０ ｍｍ×４．６ ｍｍ， ５ μｍ）为固定相，乙腈－水（２４∶７６，Ｖ／Ｖ）为流动相，检测波长２０３ ｎｍ，流速１．０ ｍＬ／ｍｉｎ，柱温３０ ℃。结果表明，罗汉果皂苷Ｖ在０．２１～２．１０ μｇ范围内线性关系良好（ｒ＝０．９９９ ３），平均回收率为９７．６４％，ＲＳＤ为１．６６％。该方法可用于富硒罗汉果果实中罗汉果皂苷Ｖ含量的测定。
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关键词 ：罗汉果（Ｓｉｒａｉｔｉａ ｇｒｏｓｖｅｎｏｒｉｉ）；罗汉果皂苷Ｖ；高效液相色谱法
中图分类号：Ｒ２８４．１ 文献标识码：A 文章编号：0439－８114（２０15）02－0444-02
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.02.048
罗汉果（Ｓｉｒａｉｔｉａ ｇｒｏｓｖｅｎｏｒｉｉ）属葫芦科（Ｄｕｃｕｒｂｉ ｔａｃｅａｅ），主产于广西，为中国特色植物，在东南亚及欧美地区享有良好声誉，备受人们青睐，被誉为“东方神果”。罗汉果味甘、性凉，具有清热润肺，利咽开音，滑肠通便等功效，常用于治疗肺火咳嗽、咽痛失音、便秘等，药用价值高［１］。富硒罗汉果是近年研制出的罗汉果新品种，除上述功效外，富含硒元素，具备清除体内过量羟基自由基的功效［２］，可抗氧化、增强免疫力、抗疲劳等［３，４］。葫芦烷型三萜皂苷类成分罗汉果皂苷Ｖ是富硒罗汉果中的主要有效成分［５－８］，通过建立富硒罗汉果中罗汉果皂苷Ｖ的ＨＰＬＣ分析方法，将有助于控制富硒罗汉果制剂的质量，为开发相关产品提供参考。
１ 材料与方法
１．１ 材料与试剂
富硒罗汉果（产地：广西桂林，桂林亦元生现代生物技术有限公司提供，经桂林医学院生药学教研室品种鉴定为富硒罗汉果）；罗汉果皂苷Ｖ（批号：２０１２０６１９，纯度≥９８％，上海源叶生物科技有限公司）。
甲醇、乙腈为色谱纯，去离子水等。
１．２ 仪器
１１００型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；ＢＳ１１０Ｓ型电子分析天平（北京赛多利斯天平有限公司）；１８１０Ａ型电热恒温水浴锅（上海医疗器械五厂）；ＳＹ－３６０型超声波提取器（上海宁商超声仪有限公司）；ＭＳＰ－８６００型微波消解仪（北京北分瑞利分析仪器公司）。
１．３ 方法
１．３．１ 色谱分析 以Ｄｉａｍｏｎｓｉｌ Ｃ１８（２５０ ｍｍ×４．６ ｍｍ， ５ μｍ）为色谱柱，以乙腈－水（２４∶７６）为流动相，检测波长为２０３ ｎｍ，柱温３０ ℃，流速１． ０ ｍＬ／ｍｉｎ，样品过０．２２ μｍ微孔滤膜后，进样１０ μＬ，其理论板数按罗汉果皂苷Ｖ峰计算应不低于３ ０００。
１．３．２ 对照品溶液的制备 称取１０．５ ｍｇ罗汉果皂苷Ｖ于５０ ｍＬ容量瓶中，加甲醇溶解并定容至５０ ｍＬ，摇匀，得０．２１ ｍｇ／ｍＬ对照品溶液。
１．３．３ 供试品溶液的制备 取富硒罗汉果粉末０．５ ｇ，加入甲醇５０ ｍＬ，加热回流２ ｈ，回收溶剂，减压蒸干，加去离子水１０ ｍＬ溶解，以ＡＢ－８大孔树脂柱纯化，依次以去离子水、２０％（Ｖ／Ｖ）乙醇各１００ ｍＬ洗脱［７］，弃去洗脱液，５０％（Ｖ／Ｖ）乙醇１００ ｍＬ洗脱，收集洗脱液，挥干，残渣以流动相溶解，定容至１０ ｍＬ，摇匀待测。
１．３．４ 硒的测定 取富硒罗汉果粉末０．５ ｇ于消化管中，加１０ ｍＬ硝酸、２ ｍＬ过氧化氢，摇匀，微波消化后，加水至２５ ｍＬ，用稀盐酸调至ｐＨ ２，加１％ （m/v）邻苯二胺２ ｍＬ，振摇，放置１ ｈ，加甲苯１０ ｍＬ萃取，取甲苯液，在３４０ ｎｍ处测定，并计算硒含量。
２ 结果与分析
２．１ 线性关系的考察
对照品和样品的色谱图见图１。由图１可知，该方法可实现目标化合物的有效分离。取罗汉果皂苷Ｖ对照品溶液，分别吸取不同体积（２～２０ μＬ）注入液相色谱仪分析，峰面积（Ｙ）与进样量（Ｘ）的线性回归方程为Ｙ＝３１０ ６６２．９Ｘ＋１０７．３（ｒ＝０．９９９ ３）。结果表明，罗汉果皂苷Ｖ进样量在０．２１～２．１０ μｇ范围内与峰面积线性关系良好。
２．２ 方法学分析
取供试品溶液，重复进样测定６次，罗汉果皂苷Ｖ峰面积的ＲＳＤ为１．１２％，说明本方法精密度良好；称取６份样品，各０．５ ｇ，参照上述方法分析，测定样品中罗汉果皂苷Ｖ平均含量达１０．７５ ｍｇ／ｇ（ＲＳＤ＝１．３７％），表明该方法重现性良好；称取样品０．５ ｇ，参照上述方法制备样品提取液，并于０，１，２，４， ６，１２，２４ ｈ测定，其峰面积ＲＳＤ为２．０３％，表明提取液中罗汉果皂苷Ｖ在２４ ｈ内稳定性良好；称取已知罗汉果皂苷Ｖ含量为１０．７５ ｍｇ／ｇ的富硒罗汉果样品粉末０．２５ ｇ，然后加一定量的罗汉果皂苷Ｖ，测定分析，计算回收率为９５％～１０５％，平均回收率９７．６４％（ＲＳＤ＝１．６６％），表明该法准确。
２．３ 样品分析
取３批样品（２０１３０９２１，２０１３１００９，２０１３１０１１），按上述方法分别测定罗汉果皂苷Ｖ和硒含量，结果表明，样品中罗汉果皂苷Ｖ含量分别为７．６１，１０．７５，
９．３３ ｍｇ／ｇ，硒含量分别为２８．７７，３１．０９，３０．５６ μｇ／ｇ，其中罗汉果皂苷Ｖ符合２０１０版药典中对罗汉果含量的要求［９］。
３ 讨论
罗汉果皂苷味甜，甜度约为蔗糖的３００倍，不含热量，理化性质稳定，易溶于水，作为食品添加剂具有安全无毒的优点，适合长期食用，在国家强制标准《ＧＢ２７６０食品添加剂使用标准》中规定，罗汉果皂苷可不限量用于各类食品，罗汉果皂苷在药品和食品中具有广泛的应用前景［１０］。
富硒罗汉果是桂林近年研制栽培出的新品种。通过收集优良栽培品种和野生株系，利用物理和化学方法诱导罗汉果植株染色体加倍、将二倍体大花粉与单倍体卵细胞杂交，培育出有效成分含量大幅提高的无子富硒罗汉果，其中果实中硒元素含量高达３０ μｇ／ｇ左右。目前，富硒罗汉果药用价值的研究尚处于起步阶段，开展相关系统研究，将挖掘其发展潜力，其经济效益和社会效益前景广阔。
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参考文献：
［１］ 龙 颖，董 威，王 勤，等．罗汉果新功效的研究现状分析［Ｊ］．山东医药，２０１２，５２（４３）：９５－９７．
［２］ 李华为，赵素云，铁 梅．富硒金针菇对羟自由基的清除作用［Ｊ］． 食品科学，２０１０，３１（１７）：１８－２０．
［３］ 夏 星，钟振国，林彩云，等．罗汉果皂苷抗疲劳及耐缺氧作用［Ｊ］．中国实验方剂学杂志，２０１２，１８（１７）：１９８－２０１．
［４］ 肖 刚，王 勤．罗汉果甜苷保肝作用实验研究［Ｊ］．中国实验方剂学杂志，２０１３，１９（２）：１９６－２００．
［５］ 胡军影，马双成，程显隆，等．ＲＰ－ＨＰＬＣ法测定罗汉果中罗汉果皂苷Ｖ的含量［Ｊ］．药物分析杂志，２００８，２８（４）：５４４－５４６．
［６］ 陈维军，张俐勤，戚向阳，等．反相高效液相色谱法测定罗汉果皂苷的含量［Ｊ］．中药材，２００５，２８（７）：５５９－５６１．
［７］ 周 兢，王梦月，李晓波，等．ＨＰＬＣ法测定罗汉果中罗汉果苷Ｖ和１１－氧化罗汉果苷Ｖ［Ｊ］．中草药，２００７，３８（２）：１９６－１９８．
［８］ 欧 莹，陈金月，覃荣灵．ＨＰＬＣ测定罗汉果中罗汉果甜苷Ｖ的含量［Ｊ］．广西中医学院学报，２００７，１０（４）：８５－８６．
［９］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）［Ｍ］．北京：中国医药科技出版社，２０１０．
［１０］ 唐克军，周迪平，罗 习，等．提取生物活性物质高纯度罗汉果苷Ｖ的新工艺［Ｊ］．企业科技与发展，２０１２（８）：１６－１８．
（责任编辑 周有祥）