李 雪１，李 梅２，陈春丽３，杨文娟１
（１．新疆维吾尔自治区农产品质量安全监督检验中心，乌鲁木齐 ８３００４９；２．华润赛科药业有限责任公司，北京 １００１２４；３．新疆医科大学药学院，乌鲁木齐 ８３００１１）
摘要：采用高效液相色谱法，研究了多菌灵在新疆葡萄中的最终残留。结果表明，多菌灵最低检出浓度为０．０２ ｍｇ／ｋｇ，添加浓度在０．０５～１．００ ｍｇ／ｋｇ范围内，回收率为７０．１４％～９２．３８％，ＲＳＤ≤６．２０％。田间试验结果表明，多菌灵按照低剂量和高剂量各施药３次和４次，２８ ｄ后残留量均降至０．１７ ｍｇ／ｋｇ以下，低于多菌灵在葡萄中的最大允许残留量３．０ ｍｇ／ｋｇ。
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关键词 ：多菌灵；葡萄；最终残留；高效液相色谱法
中图分类号：Ｏ６５７．３９ 文献标识码：A 文章编号：0439－８114（２０15）04－0957-03
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.04.048
收稿日期：２０１４－１１－２９
作者简介：李 雪（１９８１－），女，河北保定人，高级农艺师，硕士，主要从事农产品质量安全研究，（电话）１３６３９９０３２７６（电子信箱）２６８４８６６３７０＠ｑｑ．ｃｏｍ。
多菌灵［ｃａｒｂｅｎｄａｚｉｍ，Ｎ－（２－苯并咪唑基）氨基甲酸甲酯］为结晶状粉末，属于苯并咪唑类农药，是一种高效低毒的内吸性杀菌剂，对许多子囊菌和半知菌有效，干扰原菌有丝分裂中纺锤体的形成，影响细胞分裂，起到杀菌的作用，可用于防治葡萄白腐病、黑痘病、炭疽病，是目前广泛应用的杀菌剂［１］。多菌灵残效期较长，对大鼠的生殖系统以及肝脏都有一定毒性［２－５］。目前，国内外关于多菌灵残留的研究主要针对桃、草莓、柑橘、茶叶、油菜、麦冬、三七、橙子等［４－１５］，对多菌灵在葡萄中的残留研究较少，尤其对多菌灵在新疆产葡萄中的最终残留研究鲜见报道。新疆是中国著名的葡萄产区之一，气候、地理条件独特，为了解多菌灵在新疆产葡萄中的最终残留特性，进行了５０％多菌灵可湿性粉剂在葡萄上的最终残留试验，以期为该药的合理使用和新疆葡萄产业的质量安全管理提供科学参考。
１ 材料与方法
１．１ 田间试验
田间试验于２０１１年７～９月进行，试验地点在新疆昌吉州玛纳斯县。试验农药为５０％多菌灵可湿性粉剂（江苏龙灯化学有限公司提供），供试作物为巨峰葡萄。试验设计小区面积为２０ ｍ２，每个处理设置３个重复，小区间设置保护行，另设空白对照区。在葡萄坐果期后，分别施药３次和４次，施药间隔７ ｄ，施药剂量设低剂量和高剂量，低剂量为７５０ ｇ（ａ．ｉ）／ｈｍ２，高剂量为９３７．５ ｇ（ａ．ｉ）／ｈｍ２。距最后一次施药１４、２１、２８ ｄ采集葡萄样品。试验期间，玛纳斯县试验点温度为１２．４～３９．３ ℃，土壤类型为沙壤土，ｐＨ为７．９，有机质含量为１．３％。
１．２ 仪器与试剂
ＬＣ－１０Ａ高效液相色谱仪，配紫外检测器（日本岛津）；ＦＳＨ－２Ａ型可调高速匀浆机（江苏金坛医疗器械厂）；ＤＣＹ－１１１型水浴浓缩仪（北京金科精华苑技术研究所）；ＫＱ－５００ＤＥ型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；ＧＬ－８８Ｂ型旋涡混合器（上海隆拓仪器设备有限公司）。
９８．１％多菌灵标准品（农业部农药检定所提供）；乙腈、二氯甲烷、甲醇均为分析纯试剂；氯化钠（１４０ ℃烘烤４ ｈ）；氨基固相萃取柱（５００ ｍｇ／３ ｍＬ）。
１．３ 方法
１．３．１ 液相色谱分析条件 色谱柱为Ｃ１８柱（５ μｍ，１５０ ｍｍ×４．６ ｍｍ）；柱温为３０ ℃；流动相为甲醇／水（５０／５０，Ｖ／Ｖ，下同）；流速为０．８ ｍＬ／ｍｉｎ；检测波长为２８２ ｎｍ；进样量为１０ μＬ。
１．３．２ 样品前处理 准确称取２０．０ ｇ样品于２５０ ｍＬ烧杯中，加入５０ ｍＬ乙腈，高速匀浆２ ｍｉｎ，用滤纸过滤到装有６ ｇ氯化钠的１００ ｍＬ具塞量筒中，剧烈振摇１ ｍｉｎ，在室温下静置１ ｈ，使乙腈相和水相分层。吸取１０ ｍＬ乙腈相于１０ ｍＬ刻度试管中，置于８０ ℃水浴浓缩仪上加热，蒸发近干，加入２．０ ｍＬ二氯甲烷／甲醇（９５／５）溶解，漩涡混合，待净化。
１．３．３ 样品的净化 将氨基柱先用３ ｍＬ二氯甲烷／甲醇（９５／５）预淋洗，当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即倒入上述待净化液，用１０ ｍＬ刻度试管接收洗脱液，样品依次用３、３、２ ｍＬ二氯甲烷／甲醇（９５／５）淋洗，收集淋洗液，于７０ ℃恒温水浴浓缩近干，用甲醇／水（３／２）定容至２ ｍＬ，旋涡混合，使用０．２２ μｍ微孔滤膜过滤，待测。
２ 结果与分析
２．１ 检测方法的线性范围和回收率
以峰面积为纵坐标，标准样品浓度为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为ｙ＝６２ ５９９ ｘ＋３ ２６９．６，ｒ＝０．９９８，多菌灵在０．０５～２．０ ｍｇ／Ｌ呈良好线性关系。
按照前述方法，取葡萄空白样品，分别添加０．０５、０．５０和１．００ ｍｇ／ｋｇ ３个浓度５次重复的添加回收率试验。结果表明，葡萄样品中多菌灵的平均添加回收率为７０．１４％～９２．３８％，ＲＳＤ≤６．２０％。方法最低检出限为０．０２ ｍｇ／ｋｇ。多菌灵标准品及葡萄样品色谱图分别见图１、图２。
２．２ 最终残留分析
根据上述方法，分析了葡萄的最终残留，结果见表１和图３。结果显示，２种施药剂量各连续施药３次和４次，末次施药１４ ｄ后多菌灵残留量均降至０．７ ｍｇ／ｋｇ以下，２１ ｄ后残留量降至０．４ ｍｇ／ｋｇ以下，２８ ｄ后残留量降至０．１７ ｍｇ／ｋｇ以下。
３ 讨论
按照ＧＢ ２７６３－２０１４中规定，多菌灵在葡萄上的最大允许残留量（ＭＲＬ）为３．０ ｍｇ／ｋｇ。本试验表明，推荐浓度７５０ ｇ（ａ．ｉ）／ｈｍ２和高浓度９３７．５ ｇ（ａ．ｉ）／ｈｍ２， ２８ ｄ后，多菌灵在葡萄上的最终残留量均低于ＭＲＬ值，未超出残留限量，说明多菌灵在新疆北部一般气候条件下，按照推荐剂量使用是安全的。
另外，从图３可以看出，虽然单独两种施药剂量施药３次和４次，多菌灵最终残留量均随距末次施药间隔期的延长而递减，但是其残留量并没有完全按照施药剂量降低和施药次数减少规律性降低。只有低剂量组施药３次比施药４次残留量有所降低，而低剂量组施药４次和高剂量组施药３次１４ ｄ后的残留量反而高于高剂量组施药４次。造成以上这些数据波动可能的原因为：①采样误差； ②称量每份样品时果肉和果皮比例不同；③试验地每株葡萄的光照时间等自然因素不同，具体原因有待进一步试验验证。从表１和图３还可以看出，两种施药剂量施药３次和４次，施药２８ ｄ后，多菌灵最终残留量相差不多，在０．１５５～０．１７０ ｍｇ／ｋｇ之间，这说明距末次施药２８ ｄ后，施药剂量和施药次数对多菌灵的最终残留量已经影响不大。
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（责任编辑 周有祥）