裴 显，娄方明，张建永，刘 云，刘 流，晏 容，李晓飞
（遵义医学院，贵州 遵义 563000）
摘要：采用固相微萃取－气相色谱－质谱联用技术（SPME－GC－MS）分析黑黄小斑蝥（Mylabris cichorii Linnaeus）挥发性成分的方法。SPME的萃取头为100 μm PDMS，样品用量为0．4 g，平衡及吸附温度为80 ℃，平衡时间为30 min，吸附时间为15 min，解吸时间为2 min。从斑蝥样品中分离得到21个色谱峰，鉴定出11个化合物，其中共有峰为斑蝥素、环己甲醇、十三烷、环己醇和1，13－十四碳二烯，但产地间成分和含量差异较大。该法可用于斑蝥挥发性成分的快速分析，为评价斑蝥质量提供参考。
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关键词 ：黑黄小斑蝥（Mylabris cichorii Linnaeus）；挥发性成分；固相微萃取－气相色谱－质谱联用（SPME－GC－MS）
中图分类号：R284．1 文献标识码：A 文章编号：0439－8114（2015）06－1461-04
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.06.046
Analyzing Volatile Components in Mylabris Cichorii Linnaeus with SPME－GC－MS
PEI Xian， LOU Fang－ming， ZHANG Jian－yong， LIU Yun， LIU Liu， YAN Rong， LI Xiao－fei
（Zunyi Medical University， Zunyi 563000， Guizhou，China）
Abstract： The volatile components in Mylabris cichorii Linnaeus were analyzed with SPME method. 0．4 g sample was extracted by 100 μm PDMS fiber， equilibrated at 80 ℃ for 30 min， adsorpted for 15 min， and desorbed for 2 min． The results showed that 21 peaks were obtained and 11 components including cantharidin， cyclohexanemethanol， tridecane， cyclohexanol and 1， 13－tetradecadiene were identified. There were difference in samples from varied places． This method is suitable for rapidly analyzing the volatile components in Mylabris cichorii Linnaeus. It will provide a reference for evaluating its quality．
Key words： Mylabris cichorii Linnaeus； volatile components； SPME－GC－MS
收稿日期：2014－11－05
基金项目：国家自然科学基金项目（81260488）；贵州省科技厅项目［黔科合ZY字（2012）3009；黔科J字LKZ（2011）01；
黔科合社字（2009）5042］；贵州省中药管理局项目［黔中医药发（2011）78］
作者简介：裴 显（1990－），女，江苏滨海人，在读硕士研究生，研究方向为药用昆虫，（电话）14785750203（电子信箱）peixianztsh@126．com；
通信作者，李晓飞，主要从事药用昆虫研究，（电话）0851－28609056（电子信箱）lixiaofei35@sohu．com。
斑蝥系芫青科昆虫—南方大斑蝥（Mylabris phalerata Pallas）或黑黄小斑蝥（Mylabris cichorii Linnaeus）的干燥虫体［1］。斑蝥性辛、热，归胃、肝、肾经，具破血消癥、攻毒蚀疮、发泡冷灸之功效，临床常用于癥瘕癌肿、积年顽癣，瘰疬，赘疣，痈疽不溃，恶疮死肌等疾病的治疗［2］。斑蝥主产于贵州、广西、陕西、云南等省。斑蝥含有大量挥发性物质，具特殊气味［3－7］，闻之过久会使人产生窒息之感。研究表明，斑蝥的主要化学成分是斑蝥素（Cantharidin），可挥发，具抗癌作用，但斑蝥中其他挥发性成分报道较少。固相微萃取技术（Solid phase microextraction，SPME）属于非溶剂型萃取法［8－10］，是一种新型的样品预处理方法，其装置简单、操作方便、适合于大型分析仪器联用，已广泛应用于挥发性成分分析。采用SPME－GC－MS分析斑蝥的挥发性成分，将有助于全面解析斑蝥的挥发性成分，为挖掘斑蝥资源提供参考。
1 材料与方法
1．1 仪器
Agilent 6890－5973N气相色谱质谱联用仪（美国安捷伦公司）；HP－1510型气相色谱顶空加热器（上海济成分析仪器有限公司）；手动固相微萃取装置（美国Supelco公司）；萃取纤维头（7 μm PDMS涂层、100 μm PDMS涂层及85 μm PA涂层）。
1．2 材料
斑蝥药材收集自贵州（1.黔南布依族苗族自治州罗甸县罗悃镇，2.遵义市遵义县龙坪镇，3.黔西南布依族苗族自治州望谟县）、广西、陕西等5个产区。经遵义医学院药学院张建永博士鉴定为黑黄小斑蝥的干燥虫体。
1．3 方法
1．3．1 斑蝥挥发性成分的SPME方法 取干燥的虫体粉碎，过60目筛，备用。称取斑蝥粉末0．4 g于5 mL样品瓶中，盖上瓶盖，置于顶空加热器中，恒温80 ℃下，平衡30 min，将纤维头接上手柄，然后插入至样品瓶中，缓慢推出萃取头，使萃取头处于样品瓶上部空间约1/3处，在80 ℃下顶空萃取15 min，随后拔出萃取头，立即插入气质进样口中（进样口温度为250 ℃） ，解吸2 min。
1．3．2 分析条件 色谱柱为HP－5MS色谱柱（30 m×0．25 mm×0．25 μm），载气为高纯He，流速0．5 mL/min，不分流，进样口温度250 ℃。程序升温：初始温度50 ℃，以3 ℃/min升至250 ℃；溶剂延迟4．2 min；质谱电离方式为EI，电子能量70 eV，四极杆温度150 ℃，离子源温度230 ℃，质量扫描范围m/z 30～500；用峰面积归一化法计算各组分的相对质量分数，鉴定色谱峰总峰面积初始值大于12．5 mV·s、初始峰宽大于0．102 min的挥发油成分，采用Wiley和NIST08S谱库检索鉴定化合物结构。
2 结果与分析
2．1 分析条件的建立
分别考察了100 μm PDMS、7 μm PDMS和85 μm PA 3种纤维头的萃取能力。考察检出峰个数和色谱峰总面积大小，结果表明，在相同的积分条件下，100 μm PDMS共检测出99个峰，峰面积和为3．926×106 mV·s；7 μm PDMS共检测出87个峰，峰面积和为3．813×106 mV·s；85 μm PA没有检测出峰。由于100 μm PDMS萃取头吸附效率高，故选用100 μm PDMS纤维头。
样品用量的多少能够影响纤维头吸附量的多少，从而影响分析结果的重现性。试验考察了0．2、0．4、0．6 g样品对色谱峰总面积的影响。结果表明，0．4 g样品获得的峰总面积最大，且峰型对称，无平头峰。
吸附平衡温度和时间等对萃取头的吸附量影响很大，试验考察了50、60、70、80、90、100、110 ℃ 共计7个温度对色谱峰总面积的影响，结果见图1。结果表明，随着温度升高，组分数量增加，吸附温度对总峰面积的影响呈现单峰曲线，当温度小于80 ℃时，总峰面积随温度的升高而增大，在80 ℃时达到最大，随后随温度升高而减小。故选择吸附温度为80 ℃。
试验考察了15、20、25、30、35、40、45 min等7个平衡时间对色谱峰总面积的影响，结果见图2。由图2可知，样品平衡时间越长，平衡量越大，当平衡时间达到30 min时效果最好，故萃取平衡时间选择30 min。
试验考察了5、10、15、20、25、30、35 min等7个不同吸附时间对色谱峰总面积的影响，结果见图3。由图3可知，吸附时间越长，吸附量越大，平衡时间达到15 min后，吸附和解吸达到相对平衡。因此，吸附时间选择15 min。
解吸时间过短，可能导致解吸不完全，下一次的吸附易产生误差；若解吸时间过长，则会使色谱峰变宽，影响保留时间。试验考察了1、2、3 min 等3个不同解吸时间对色谱峰的影响，结果表明2 min即可解吸完全。
经对固相微萃取条件的考察，得出萃取斑蝥挥发成分的最佳条件为：萃取头为100 μm PDMS，样品用量为0．4 g，平衡及吸附温度为80 ℃，平衡时间为30 min，吸附时间为15 min，解吸时间为2 min。
2．2 不同产地斑蝥的挥发性成分分析
从斑蝥中共分离了21个色谱峰，共鉴定11个化合物（见图4和图5）。其中贵州1主要含肌苷、环己酮、环己甲醇、十三烷、环己醇、斑蝥素、9，12－十八烷二烯酸甲酯、1，13－十四碳二烯；贵州2主要含环己酮、环己甲醇、十三烷、环己醇、斑蝥素、9，12－十八烷二烯酸甲酯、1，13－十四碳二烯；贵州3主要环己酮、环己甲醇、十三烷、环己醇、斑蝥素、9，12－十八烷二烯酸甲酯、1，13－十四碳二烯；广西省的斑蝥主要含肌苷、环己酮、环己甲醇、十三烷、环己醇、（＋）－α－柏木萜烯、邻苯二甲酸二甲酯、顺－3－十一碳烯、斑蝥素、9，12－十八烷二烯酸甲酯、1，13－十四碳二烯；陕西省主要含环己甲醇、十三烷、环己醇、（＋）－α－柏木萜烯、顺－3－十一碳烯、斑蝥素、9，12－十八烷二烯酸甲酯、1，13－十四碳二烯，共有峰为斑蝥素、环己甲醇、十三烷、环己醇和和1，13－十四碳二烯。不同省份之间成分差异较大，同一省份不同产地之间差异较小。
采用Wiley和NIST 08S等数据库进行检索对比，并结合人工图谱解析，不同产地斑蝥的鉴定结果和含量差异见表1和图5。其中环己甲醇含量大小依次为贵州3、贵州2、广西、陕西和贵州1；十三烷含量大小依次为陕西、广西、贵州3、贵州2和贵州1；环己醇含量大小依次为贵州2、陕西、贵州3、贵州1和广西；斑蝥素含量大小依次为陕西、贵州2、贵州3、贵州1和广西。1，13－十四碳二烯含量大小依次为贵州1、贵州2、贵州3、陕西和广西。
由表1可知，不同产地斑蝥所含挥发油成分差异较大，其共有成分是斑蝥素、环己甲醇、十三烷、环己醇和1，13－十四碳二烯（图6），斑蝥素的相对含量超过50％，其中陕西斑蝥的斑蝥素含量最高。斑蝥挥发油鉴定出的成分偏少，说明还有许多微量成分还未分析出来，也有可能是斑蝥样品放置过久，损失了部分成分。
3 讨论
试验采用的SPME－GC－MS技术广泛用于动、植物挥发油，精油及低极性化合物的分析，能全面快速获得其组成信息，且操作时间短、样品量小、无需萃取溶剂、对被测样品选择性高、重现性好，适用于对斑蝥挥发油的快速检测分析。
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参考文献：
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