陈小强，于泽涛，孙 宁，新 楠，邓林霞
（天津农学院农学与资源环境学院，天津 ３００３８４）
摘要：以黑玫瑰石竹（Ｄｉａｎｔｈｕｓ ｌｉｎｎ）茎段为外植体，ＭＳ培养基为基本培养基，研究了６－ＢＡ与ＮＡＡ对黑玫瑰石竹试管苗不定芽分化的影响。结果表明，采用ＭＳ＋１．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ和０．２ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ培养基对芽分化及生长效果较好。
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关键词 ：黑玫瑰石竹（Ｄｉａｎｔｈｕｓ ｌｉｎｎ）；组织培养；６－ＢＡ；ＮＡＡ
中图分类号：S681.5 文献标识码：A 文章编号：0439－８114（２０15）16－4063-02
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.16.060
收稿日期：２０１４－１２－１６
基金项目：天津市应用基础及前沿技术研究计划项目（１０ＪＣＹＢＪＣ０９０００）；国家级大学生创新创业训练计划项目（２０１４１００６１１１６）；天津市科技支撑计划重点项目（０９ＺＣＫＦＮＣ０１６００）
作者简介：陈小强（１９７６－），女，天津人，副教授，博士，主要从事植物遗传及细胞工程的研究工作，（电话）０２２－２３７８９３７６（电子信箱）ｃｈｅｎｘｉａ９６６３＠１２６．ｃｏｍ。
黑玫瑰石竹（Ｄｉａｎｔｈｕｓ ｌｉｎｎ）系多年生宿根草本植物，地生、茎直立，花朵为紫色，聚伞花絮且花期长，能够雅俗共赏，市场需求量很大［１］。常规的扦插繁殖成活率低，无法满足市场的需求，而且长期的营养生殖使病虫害加重，直接影响其商品价值。通过组织培养技术繁育黑玫瑰石竹，有快速、复壮、脱毒的效果，可大大地提高其产量和质量，同时也可以培育优良的新品种［２］。目前，国内对黑玫瑰石竹组织培养方面的研究较少，主要集中在玻璃化问题的解决，而关于激素对黑玫瑰石竹组织培养的影响报道更少［３］。因此，本试验研究了不同外源激素对黑玫瑰石竹组织培养的影响，旨在为黑玫瑰石竹乃至石竹类植物快速繁殖及大规模生产提供理论依据。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
试验材料为黑玫瑰石竹，取自天津农学院农学与资源环境学院植物细胞工程研究中心，选用的是无病害、花型好、花色纯正、品种优良、生长健壮的植株。
１．２ 培养条件
日光灯为光源，光照时间１４～１６ ｈ、光照度１ ５００～２ ０００ ｌｘ，温度２５±２ ℃，相对湿度７０％～８０％。
１．３ 试验方法
１．３．１ 外植体的采集与消毒 选取品种优良、花色纯正、花型好、无病虫害、生长健壮的植株基部采取侧芽，逐层剥去叶片，留顶部未展开的２～３对叶，切取２ ｃｍ带芽茎段，用含碱性洗涤剂的清水清洗干净。
１．３．２ 培养基的配制与灭菌 基本培养基为ＭＳ培养基，加琼脂６．３ ｇ／Ｌ，激素为６－ＢＡ（６－苄基氨基嘌呤）、ＮＡＡ（萘乙酸）。将配制好的ＭＳ培养基（ｐＨ调至５．９左右）分装在９０个培养瓶中（每瓶５０ ｍＬ接种３个茎段，每个处理有１０瓶重复）。分装好的培养基１２０ ℃高温高压蒸汽灭菌２０ ｍｉｎ。
１．３．３ 正交试验 采用Ｌ９（３４）正交试验对６－ＢＡ（Ａ）、ＮＡＡ（Ｂ）、蔗糖（Ｃ）进行设计，正交试验因素与水平见表１。
２ 结果与分析
正交试验结果与极差分析如表２所示。由表２可知，影响黑玫瑰石竹不定茎分化的影响因素大小顺序为Ｂ、Ａ、Ｃ，最佳组合为Ａ２Ｂ２Ｃ１（Ｃ３），即６－ＢＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ、ＮＡＡ ０．２ ｍｇ／Ｌ、蔗糖 ２０（４０） ｍｇ／Ｌ。
黑玫瑰石竹茎段接种在５号（６－ＢＡ １．０ ｍｇ／Ｌ， ＮＡＡ ０．２ ｍｇ／Ｌ，４０ ｇ蔗糖）的ＭＳ培养基上芽的分化率最高。通过观察可以发现，５号培养基上的试管苗长势最好（图１Ａ）。由于正交设计的试验中不包括Ａ２Ｂ２Ｃ１组合，又进行了Ａ２Ｂ２Ｃ１组合试验研究，结果见图１Ｂ，试管苗在此培养基组合中长势确实也很好。
综上所述，由于蔗糖的浓度变化对黑玫瑰石竹出芽生长影响不大，选择最适宜黑玫瑰石竹出芽的培养基为ＭＳ＋０．２ ｍｇ/Ｌ ＮＡＡ＋１．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋２０ ｇ/Ｌ 蔗糖。
３ 小结与讨论
外源激素对于黑玫瑰石竹试管苗芽的增殖分化有着显著的影响，６－ＢＡ是细胞分裂类激素，对于细胞的分化及出芽有着必要的作用［４］。ＮＡＡ是生长素类激素，对于外植体的生根有重要作用［５］。当选择１．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ ＋０．２ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ的ＭＳ培养基时不定芽的增殖效果较好。ＭＳ培养基具有高浓度的无机盐，高含量的氮、钾，尤其硝酸盐的用量很大，同时含有一定数量的铵盐，而且营养丰富，能加速愈伤组织和培养物生长的作用，因此是目前应用最广泛的培养基。王家福［６］的研究结果表明，当植物生长类激素／细胞分裂类激素＞１时不利于芽的分化；当植物生长类激素／细胞分裂类激素＝１０或者５时更利于形成根；当植物生长类激素／细胞分裂类激素＜１.0（＝０．５时最适宜）有利于芽的增值。本试验得出的结论０．２ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ与１．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ的比为０．２，符合芽的分化激素配比规律。因此，ＭＳ基本培养基中加入蔗糖２０ ｇ，选择１．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ和０．２ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ作为黑玫瑰石竹出芽的外源激素是最合适的。
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参考文献：
［１］ 刘慧民，胡 冰．花卉类植物组织培养技术发展概述［Ｊ］．北方园艺，２０００（１）：６２．
［２］ 李 军，徐 虹，王晓敏．不同因素对香石竹初代培养的影响［Ｊ］．安徽农学通报，２００８，１４（１９）：４１－４２．
［３］ 刘开辉．不同浓度的外源激素对香石竹组织培养的影响［Ｊ］．安徽农业科学，２００７，３５（１９）：５７３５－５７３６．
［４］ 周瑞金，杨 静，孔晓萍．植物生长调节剂对香石竹离体培养的影响［Ｊ］．现代园艺，２０１３（１２）：５－６．
［５］ 李 军，徐 虹，王晓敏．不同因素对香石竹初代培养的影响［Ｊ］．安徽农学通报，２００８，１４（１９）：４１－４２．
［６］ 王家福．花卉组织培养与快繁技术［Ｍ］．北京：中国林业出版社，２００６．１６６－１６７．