蒋天仪１，唐 敏１，阳 淑１，王 波２，石大兴３
（１．成都农业科技职业学院，成都 ６１１１３０；２．四川工程职业技术学院，四川 德阳 ６１８０００；
３．四川农业大学林学院，四川 雅安 ６２５０１４）
摘要：以散斑竹根七［Ｄｉｓｐｏｒｏｐｓｉｓ ａｓｐｅｒａ （Ｈｕａ） Ｅｎｇｌ．ｅｘ Ｋｒａｕｓｅ］的嫩茎段作为外植体，研究了其组织培养和快速繁殖体系。结果表明，外植体预处理后，经过７５％的乙醇消毒２０ ｓ，再用０．１％ ＨｇＣｌ２处理６ ｍｉｎ的灭菌效果最好，启动率达到７８．４0％，污染率仅为２３．７５％。初代培养最适宜的培养基是ＭＳ＋ ６－ＢＡ １．０ ｍｇ／Ｌ＋２，４－Ｄ ０．０１ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．１ ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ １．０ ｍｇ／Ｌ；ＭＳ＋ ６－ＢＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ １．５ ｍｇ／Ｌ ＋ＮＡＡ ０．２ ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ １．０ ｍｇ／Ｌ适用于继代增殖培养，丛生芽的增殖系数达到６．１0；适宜生根的培养基为ＮＡＡ １．０ ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ＋１／２ＭＳ，生根率达到９６．１３％。
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关键词 ：散斑竹根七［Ｄｉｓｐｏｒｏｐｓｉｓ ａｓｐｅｒａ （Ｈｕａ） Ｅｎｇｌ．ｅｘ Ｋｒａｕｓｅ］；组织培养；快速繁殖体系
中图分类号：Q943.1 文献标识码：A 文章编号：0439－８114（２０15）16－4070-03
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.16.062
收稿日期：２０１５－０３－２５
基金项目：四川省重点学科建设项目（ＳＺＤ０４１９）
作者简介：蒋天仪（１９８２－），女，四川成都人，讲师，硕士，主要从事观赏园艺植物的研究，（电话）０２８－８２７３５００８（电子信箱）１２８４５９５８＠ｑｑ．ｃｏｍ。
散斑竹根七［Ｄｉｓｐｏｒｏｐｓｉｓ ａｓｐｅｒａ （Ｈｕａ） Ｅｎｇｌ．ｅｘ Ｋｒａｕｓｅ］是百合科竹根七属植物，为多年生草本［１］，其叶厚纸质，花黄绿色，具紫色斑点，花被钟状［２］，春季开花，花朵俯垂，枝形优美。该种原产于林下、阴蔽山谷或溪边，是一种耐阴性很好的植物，可应用于风景林地下或建筑边缘物作地被植物，也可盆栽观赏［３］。地被植物在园林中的应用量一般很大，快速繁殖是满足园林应用的一个方面，而工厂化生产是保证苗木整齐的另一个方面。目前，工厂化生产种苗的公司并不多，专业生产地被植物的更少［４，５］。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
散斑竹根七植株采自四川省雅安市的周边山上，采回后种植于苗圃，选在５月取材，剪取３～４ ｃｍ的带芽茎段作为外植体。
１．２ 试验方法
１．２．１ 外植体表面灭菌 将外植体在加有洗衣粉的洗涤液中浸泡１０ ｍｉｎ，接着用自来水冲洗２～３次，然后放入７５％乙醇中处理２０ ｓ后用无菌水冲洗３次，再用０．１％ ＨｇＣｌ２溶液分别处理３、６和９ ｍｉｎ，期间不停地振荡，最后使用无菌水冲洗５次。每处理接种２０个外植体，重复３次，灭菌后的外植体接入启动培养基先暗培养７ ｄ，再进行光照培养（１２ ｈ/ｄ），３５ ｄ后统计启动率和污染率。
１．２．２ 初代培养 将处理好的带芽嫩茎段作为外植体进行接种，基本培养基为ＭＳ。设置基本培养基ＭＳ，加入６－ＢＡ（０、０．５、１．０、２．０ ｍｇ／Ｌ）、２，４－Ｄ（０．０１、０．０５、０．１、０．５ ｍｇ／Ｌ）、ＮＡＡ（０、０．０５、０．１、０．５ ｍｇ／Ｌ）和ＩＡＡ（ ０、０．１、０．５、１．０ ｍｇ／Ｌ），共１６个处理。每处理接种１０株外植体，重复３次，培养３０ ｄ观察统计芽启动率。
１．２．３ 继代增殖培养 将初代培养获得的茎段丛生芽切割为带１个芽的小块，转接到继代增殖培养基上，以ＭＳ为基本培养基，加入６－ＢＡ（０．５、１．０、２．０ ｍｇ／Ｌ）、ＫＴ（０．５、１．０、１．５ ｍｇ／Ｌ）、ＮＡＡ（０．０１、０．１、０．２ ｍｇ／Ｌ）和ＩＢＡ（０．１、０．５、１．０ ｍｇ／Ｌ），共１２个处理。每个处理接种２０株外植体，重复３次，４０ ｄ后统计增殖系数及有效苗数。
１．２．４ 生根培养 在增殖培养中选取高约３ ｃｍ的健壮丛生芽，切割成单苗，接种于生根培养基中，基本培养基为ＭＳ，加入ＮＡＡ（０．１、０．５、１．０ ｍｇ／Ｌ）、ＩＢＡ（０．０５、０．１、０．５ ｍｇ／Ｌ）和ＭＳ培养基（ＭＳ、１／２ＭＳ、１／４ＭＳ），共９个处理。每个处理接种２０株外植体，重复３次，４０ ｄ后观察统计生根率。
２ 结果与分析
２．１ 不同表面灭菌方式对灭菌效果的影响
对散斑竹根七在不同灭菌时间处理中的启动率和污染率进行显著性差异ＳＳＲ检验，结果见表１。从表１中可以看出，随着０．１％ ＨｇＣｌ２处理时间的增加，污染率逐渐降低，启动率则表现为先上升后下降。处理３ ｍｉｎ时，外植体启动率较高，为７６．３９％，但污染率也高（４８．６１％）；处理６ ｍｉｎ时启动率最高，达到７８．４0％，污染率较低，为２３．７５％。而随着灭菌处理的时间延长，污染率降至最低（１４．２９％），但启动率仅有５１．２６％，为各处理中最低。综合来看，采用０．１％ ＨｇＣｌ２灭菌６ ｍｉｎ是较为适宜的外植体表面灭菌时间。
２．２ 不同激素组合对初代培养的影响
接种１周后，接种的茎段腋芽开始萌动，大约３～５ ｍｍ，３０ ｄ绝大部分的芽苗长至２ ｃｍ。从表２中可以看出，处理９（ＭＳ＋ ６－ＢＡ １．０ ｍｇ／Ｌ＋２，４－Ｄ ０．０１ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．１ ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ １．０ ｍｇ／Ｌ）对散斑竹根七芽的诱导效果最好，启动率达到８５．２０％，与其他处理差异极显著。随着６－ＢＡ浓度的升高，芽启动率逐渐升高，当６－ＢＡ达到１．０ ｍｇ／Ｌ的时候，处理９、１０、１１、１２的芽启动率均达到７０％以上。但当６－ＢＡ达到２．０ ｍｇ／Ｌ的时候，启动率又开始下降。同时，经过方差分析发现，２，４－Ｄ对启动诱导影响不显著。
２．３ 不同激素组合对继代增殖培养的影响
从表３可以看出，对于丛生芽的诱导，３号处理效果最好，增殖系数达到６．１０。各处理多数增殖系数都在４．０～５．０之间。经过方差分析发现，６－ＢＡ对继代增殖的影响呈极显著差异，ＮＡＡ呈显著差异。当６－ＢＡ浓度为最低水平，而ＮＡＡ的水平为最高值时，增殖系数最大。
２．４ 不同激素组合对生根培养的影响
从表４中可以看出，在生根培养中，７号处理（ＮＡＡ １．０ ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ＋１／２ＭＳ）的效果极显著高于其他处理，生根率达到９６．１３％，其次是９号处理，生根率为９１．８％，与其他处理的差异也达极显著水平，经过方差分析发现，ＮＡＡ对生根的影响极显著。随着ＮＡＡ的浓度升高，生根率逐渐升高，而在ＮＡＡ处于最高值水平时，１／２ＭＳ培养基的生根率最高，说明适当降低无机盐的浓度有利于散斑竹根七瓶苗的生根培养。
３ 小结与讨论
带芽茎段的初代诱导时，６－ＢＡ、ＮＡＡ以及二者的配合使用促进了茎段芽的启动。在一定范围内，随着６－ＢＡ浓度的升高，启动率也升高，说明６－ＢＡ浓度过高对芽的诱导起抑制作用，同时还发现２，４－Ｄ与ＩＢＡ对散斑竹根七芽的启动诱导影响不显著。本试验中ＮＡＡ对生根培养影响极显著，且随着ＮＡＡ用量的减少生根率也呈下降的趋势。这与许多研究中低浓度的ＮＡＡ促进生根、使生根时间缩短的结论相反［４］。这说明不同植物对激素浓度反应不同，与植株本身体内激素种类和水平相关。在组织培养生根阶段，一般认为低浓度的无机盐对壮苗生根有利，而生根状况的好坏直接影响着组培成功的最后一步。本试验的生根培养中，采用了ＭＳ、１／２ＭＳ、１／４ＭＳ为基本培养基，其中１／２ＭＳ生根效果最好，生根率达９６％。在之前的培养中，经过外源激素的使用和转瓶继代的培养，培养物本身积累了许多生长激素，低盐的培养基有利于过多激素的释放，防止植株徒长、黄化等。因此，在散斑竹根七的生根培养中１／２ＭＳ的培养基生根效果最佳。
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参考文献：
［１］ 中国科学院中国植物志编辑委员会．中国植物志［Ｍ］．北京：科学出版社，２０１３．
［２］ 李明银，郭 英，陈 娟，等．龙门山地区常见斑叶观叶植物调查［Ｊ］．江苏农业科学，２０１１， ３９ （２）：２６０－２６３．
［３］ 袁桂美，王海洋，彭先涛．缙云山野生观赏植物资源及其园林应用［Ｊ］．南方农业（园林花卉版），２００７（８）：２６－２９．
［４］ 刘 敏．花卉组织培养与工厂化生产［Ｍ］．北京：地质出版社，２００２．４５．
［５］ 陈志萍，虞志军，闵 玮．几种野生地被的引种栽培［Ｊ］．北方园艺，２０１１（２０）：９２－９４．