陈英，张西英，刘江娜
（兵团第六师农业科学研究所 ，新疆 五家渠 831300）
摘要：在马铃薯脱毒组培苗的快繁生产过程中常会出现污染问题，马铃薯组培工厂化发展的瓶颈是解决试管苗快繁过程的污染问题。在马铃薯脱毒组培苗的培养基中添加安全、稳定、光谱杀菌剂二氯异氰尿酸钠（SDIC），从不同浓度的SDIC灭菌效果、培养基中加入SDIC是否高压灭菌、SDIC加入不同培养基对瓶苗生长的影响、SDIC对试管薯诱导的影响等方面进行试验，结果表明，一定浓度SDIC能有效降低脱毒试管苗组培快繁的污染率，不影响瓶苗的正常生长。采用SDIC添加到培养基中，可进行开放式快繁，进行高效、规模化生产组培苗。
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关键词 ：二氯异氰尿酸钠（SDIC）；马铃薯；组培苗；培养基；快繁
第六师农科所成立的兵团马铃薯脱毒中心已经连续4年开展了大规模的脱毒苗工厂化快繁，脱毒苗生产能力超过1 000万株/年。脱毒苗在微型薯生产中表现出结薯均匀、外观整齐、品种特性一致性好和结薯率高的特性。其在种薯良繁体系中占有主导地位。但在马铃薯脱毒组培苗的快繁生产过程中常出现的污染问题已成为阻碍马铃薯组培工厂化发展的瓶颈。据王志成等[1]报道，污染率每升高5%，试管苗繁殖速度递减40%，室内直接生产成本递增10%。甚至造成重要资源的丢失，给科研与生产带来巨大的损失。新疆栽培的马铃薯一般每年生长一季，如何在短期内迅速快繁大量脱毒苗，提高生产效率，控制污染率成为工厂化生产的研究课题。抗生素一直是在组培中用来防止污染的传统药剂，但它有抗菌谱，在组织培养应用中也是一个限制因素 [2]，本试验针对杀菌剂二氯异氰尿酸钠在培养基中的使用研究，开展了脱毒苗开放式接种，探索解决组培生产上的制约问题。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 脱毒苗
选用本单位自行茎尖脱毒并用PCR病毒检测方法检测脱毒试管苗马铃薯普通栽培种“Atlantic”为供试材料。
1.1.2 杀菌剂
二氯异氰尿酸钠（俗称：优氯净），简称SDIC。易溶于水，具有杀菌力强，稳定性好，安全低毒，无污染等特点，是高效广谱消毒杀菌剂，能够迅速杀灭病毒、细菌繁殖体及其芽孢，并具有除臭、洗涤去污、灭藻、净水和漂白等功效。
1.2 试验方法
1.2.1 培养基中加入不同浓度的SDIC对脱毒试管苗生长的影响试验
不同浓度的SDIC加入MS培养基中，处理见表1。灌制培养基试管不进行高温灭菌消毒，直接接种试管苗，pH值为5.8。对照用常规的MS并高压灭菌。从试管苗生长中筛选SDIC的浓度。每个处理接种10瓶苗，每瓶15株苗，重复3次。瓶苗培养120 d，观察污染率、瓶苗存活情况。详见表1。
1.2.2 不同浓度的SDIC在不同灭菌条件下对瓶苗生长的影响试验
4种不同浓度的SDIC加入到MS培养基中，分成2部分，一部分不进行高压灭菌直接接种，一部分高压灭菌后再接种，每个处理做10瓶，每瓶15株苗，重复3次，统计污染率及瓶苗生长情况，详见表2。
1.2.3 不同浓度的SDIC对固体培养基瓶苗和液体培养基瓶苗生长的影响试验
固体培养基A、B、C、D和液体培养基A1、B1、C1、D1分别加入不同浓度的SDIC，详见表3。每个处理做10瓶，每瓶15株苗，重复3次，统计污染率及瓶苗生长情况。
1.2.4 试管薯诱导培养基中加入SDIC对结薯的影响
将生长健壮、每瓶15株并带有6 ~ 8片叶的瓶苗中加入35 mL液体诱导培养基，并加入4种不同浓度的SDIC（见表4），每个处理15瓶，重复3次，放置在黑暗环境、温度20 ℃、湿度75%条件下诱导55 d后收获。统计每瓶结薯数、每株结薯数及污染率。
2 结果与分析
2.1 培养基中加入不同浓度的SDIC对脱毒试管苗生长的影响
从表5中的数据可以看出，SDIC的浓度在0.5 g/L以上没有污染，脱毒苗也不生长，说明浓度太高，既杀死了各类杂菌，也对瓶苗产生毒害，随着浓度的降低，SDIC的浓度在0.2 g/L，污染率低，但瓶苗成活率也较低，SDIC的浓度在0.1 g/L，污染率略有增加，瓶苗成活率则大幅度提高，生长正常。
2.2 不同浓度的SDIC在不同灭菌条件下对瓶苗生长的影响
从表6中可以看出，灭菌明显比不灭菌污染率低，成活率也相应提高。通过高压灭菌和SDIC杀菌剂的加入，能有效地控制瓶苗污染率；只有SDIC的浓度在一定的范围，不用高压灭菌就能起到杀死杂菌的作用也对瓶苗生长不造成影响。
2.3 不同浓度的SDIC对固体培养基瓶苗和液体培养基瓶苗生长的影响
由于固体培养基杂菌污染速度慢，而液体培养基的污染速度快，用SDIC同时对两者处理，由表7可以看出，没有明显的区别。
2.4 试管薯诱导培养基中加入SDIC对结薯的影响
从表8中可以看出，加过SDIC的培养基在诱导时均可以正常结薯，而SDIC浓度为0.1 g/L时结薯数最多，污染率最低。
3 结论与讨论
3.1 结论
通过试验可以看出，杀菌剂在组培工厂化生产中进行开放式接种能起到一定的作用，降低成本，提高效率，降低污染。许多专业人士还研究了青霉素、链霉素等抗生素添加到培养基，其目的也是一样，但经过我们试验，在高温高压下，青霉素、链霉素容易分解，降低药效，采用过滤消毒，对生产10万瓶以上的培养基，实际操作难度较大，成本也比SDIC高得多。经过几年的组培研究，我们认为：在基础苗繁殖时，应严格遵守规范的接种程序和进行小环境控制，在下地苗的繁殖时，培养基内加入0.1 g/L SDIC 培养基灭菌与不灭菌差别不大，在大环境中组织人员集体接种，能大幅度提高生产效率，降低成本。
3.2 讨论
生物技术在现代科技手段运用中越来越广泛，作为师级科研单位，更多是把组培快繁技术运用到规模化的生产中，有效地控制组培快繁生产中的污染问题，SDIC只是降低其污染的一种方式，可以采用多种复合杀菌剂的多因素试验研究，把污染控制到3%以下，达到提高生产效率、降低成本的目的。
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参考文献
[1]王志成，刘明稀，易自力，等.杀菌剂防治植物组织培养污染的初步研究[J].长沙电力学院学报，2004（2）：1-2.
[2]胡凯，张立军，白雪梅，等.植物组织培养污染原因分析及外植体的消毒[J].安徽农业科学，2007（3）：680-681.