覃杰1，龙杰1，陆洪宾2，张伟1
（1.兵团第二师畜牧兽医工作站，新疆 库尔勒 841000；2. 兵团第二师三○团奶牛场）
摘要：从巴州地区规模牛场和散养户采集临床型乳房炎70份和隐性乳房炎96份奶样进行细菌分离鉴定，并对主要病原菌进行药敏试验。结果表明：从166份乳样中共分离出12种267株细菌，其中，主要病原菌为金黄色葡萄球菌，86株，检出率33.6%；大肠杆菌68株，检出率25.5%；停乳链球菌33株，检出率12.4%；无乳链球菌25株，检出率9.4%。临床型乳房炎大部分为混合感染（感染率61.4%），隐性乳房炎大部分为单独感染（感染率88.5%）。选择17种抗生素采用纸片琼脂扩散法对主要致病菌进行药敏试验，其中，头孢曲松钠、头孢哌酮舒巴坦、庆大小诺霉素极敏。该试验为本地区奶牛乳房炎的防治提供了理论依据。
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关键词 ：巴州地区；奶牛乳房炎；分离鉴定；药敏试验
奶牛乳房炎是奶牛最普遍的疾病，是制约奶牛养殖业发展的最重要的疾病之一。该病可导致奶牛产奶量减少、牛奶品质降低，甚至导致病牛淘汰，造成严重的经济损失，其防治问题已日益为人们所关注。微生物感染是引起奶牛乳房炎的主要原因，而目前治疗奶牛乳房炎仍主要依靠抗生素，但抗生素的长期、大量使用，使得病原菌产生了严重的耐药性，这给临床上治疗奶牛乳房炎带来了巨大的困难。本试验对巴州地区奶牛乳房炎乳样进行了细菌分离鉴定和药敏试验，以筛选出有效的抗生素药物，提高乳房炎的治愈率，缩短本病疗程。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 乳样
以巴州地区部分奶牛场及散养户为对象，选取临床型乳房炎70份和隐性乳房炎（LMT检测阳性）96份奶样。
1.1.2 培养基及试剂
普通营养琼脂培养基、5%绵羊鲜血琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、药敏试纸片等按常规方法配置[1]。
1.1.3 药物
青霉素、头孢曲松钠、氨苄西林、头孢噻呋钠、头孢哌酮舒巴坦、头孢唑啉钠、链霉素、庆大霉素、庆大小诺霉素、克林霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、林可霉素、土霉素、磺胺嘧啶钠和氟苯尼考。
1.2 试验方法
1.2.1 细菌分离培养鉴定[1]
将无菌采集的乳样3 000 r/min离心10 min后取沉淀物，接种于普通琼脂培养基、鲜血琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基后置于37 ℃恒温培养箱培养24 ~ 48 h，观察菌落生长情况及形态特征，挑取典型单个菌落涂片，革兰氏染色，镜检。根据菌落形态特征、溶血与否、染色特性及菌体形态初步判断细菌类型，参考各种细菌的生化特性，根据染色、镜检结果对分离的菌株有选择地进行生化试验。
1.2.2 药敏试验
采用纸片琼脂扩散法[２]，将主要病原菌接种于营养肉汤（链球菌接种于绵羊血清肉汤），37 ℃培养18 h，所得菌液用麦氏比浊法进行比浊，用生理盐水稀释菌液使其含菌量为1亿个/mL。吸取菌液0.1 mL均匀涂抹于平板琼脂表面，贴上药敏纸片，每种西药做3个重复，置于 37 ℃温箱中培养18 ~ 24 h，测定抑菌圈直径，以3孔的平均值表示该种药的抑菌圈大小。结果判断标准[3]：抑菌环直径 ≥ 20 mm为极度敏感，在15 ~ 19 mm之间为高度敏感，在11 ~ 15 mm之间为中度敏感，≤ 10 mm为低敏，0 mm为耐药。
2 结果与分析
2.1 细菌分离鉴定结果
从166份乳样中共分离出12种267株细菌，其中：金黄色葡萄球菌86株，检出率32.2%；大肠杆菌68株，检出率25.5%；停乳链球菌 33株，检出率12.4%；无乳链球菌25株，检出率9.4%，其余为粪链球菌、化脓链球菌、真菌、绿脓杆菌和志贺杆菌。而有2份隐性乳房炎乳样则未检出细菌。从所采乳样分离得到的病原菌来看，临床型乳房炎主要是由2 ~ 3种病原菌混合感染引起，达到61.4%（43/70），隐性乳房炎多数为1种病原菌引起，占总数的88.5%（85/96），具体结果见表1。
2.2 药敏试验结果
试验结果显示，对金黄色葡萄球菌极敏的药物为头孢曲松钠、头孢噻呋钠、头孢哌酮舒巴坦、庆大小诺霉素、左氧氟沙星、环丙沙星、泰乐菌素、氟苯尼考；对大肠杆菌极敏的药物为头孢哌酮舒巴坦、头孢曲松钠、头孢噻呋钠、环丙沙星、左氧氟沙星、庆大小诺霉素；对停乳链球菌极敏为头孢曲松钠、头孢哌酮舒巴坦、庆大小诺霉素和氟苯尼考；对无乳链球菌极敏的是头孢曲松钠、头孢哌酮舒巴坦、庆大小诺霉素和氟苯尼考。具体结果见表2。
3 小结
细菌分离鉴定得出，金黄色葡萄球菌，大肠杆菌，无乳、停乳链球菌占整个检出细菌的79.5%，是导致巴州地区奶牛乳房炎的主要病原菌。其中，临床型乳房炎以2 ~ 3种病原菌混合感染为主，而隐形乳房炎以单独感染为主。奶牛可能对单独的细菌有一定抵抗力，对多种细菌感染的抵抗力较弱，从而导致隐性和临床型乳房炎。有2份隐性乳房炎乳样未检出细菌，其原因可能是该乳房炎由病原微生物以外的原因引起或者是由未分离到的病原微生物感染引起。
药敏试验中病原菌对头孢曲松钠、头孢哌酮舒巴坦、庆大小诺霉素极敏，对青霉素、链霉素和磺胺嘧啶钠低敏，对其它药物也有不同程度的低敏。可见对常用的抗生素已产生不同程度耐药性，对不常用的产生耐药性的少。可能是由于长期使用某些抗生素，从而导致细菌耐药性的产生。
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参考文献
[1]尔秀珠，蔡妙英．常见细菌系统鉴定手册[M].北京：科学出版社，2001．
[2]韩文瑜，何昭阳，刘玉斌．病原细菌检验技术[M].长春：吉林科学技术出版社，1992.
[3]徐叔云，卞和濂，陈修．药理实验方法学[M].北京：人民卫生出版社，2002．