陶思宇 TAO Si-yu；王晓霞 WANG Xiao-xia
（华北理工大学，唐山 063000）
（North China University of Science and Technology，Tangshan 063000，China）
摘要：目的：研究银线草 Andrographis paniculata 全草的化学成分。方法：采用反相硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、Sephadex LH-20 凝胶柱色谱、制备型高效液相色谱等技术对银线草乙醇提取物进行分离纯化，并根据理化性质和波谱学手段进行结构鉴定。结果：从银线草全草乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位分离得到 12 个化合物，分别鉴定为 blumenol B （1）、Vomifoliol （2）、4-Hydroxy-2，3-dimethyl-2-nonen-4-olide （3）、atractylenolide III （4）、neolitacumone B （5）、10α-hydroxy-1-oxoeremophila-7（11），8（9）-diene-8，12-olide （6）、shizukanolide C （7）、shizukanolide H （8）、caffeic acid （9）、 p-hydroxy-coumaric acid （10）、ferulic acid （11）、protocatechuic acid （12）。结论：化合物 1～3 为首次从金粟兰属植物中分离得到。
Abstract： Objective： To study the chemical composition of Chloranthus japonicus Andrographis paniculata. Method： to use reversed-phase silica gel column chromatography， polyamide column chromatography， Sephadex LH-20 gel column chromatography， preparative high performance liquid chromatography technique for separation and purification of s Chloranthus japonicus ethanol extracts and conduct structural identification according to the physicochemical properties and spectroscopic instruments. Results： 12 compounds are isolated from the ethyl acetate fraction of Chloranthus japonicus Andrographis paniculata ethanol extracts， identified as blumenol B （1）， Vomifoliol （2）， 4-Hydroxy-2，3-dimethyl-2-nonen -4-olide （3）， atractylenolide III （4）， neolitacumone B （5）， 10α-hydroxy-1-oxoeremophila-7 （11）， 8 （9） -diene-8，12-olide （6）， shizukanolide C （7）， shizukanolide H （8）， caffeic acid （9）， p-hydroxy-coumaric acid （10）， ferulic acid （11）， protocatechuic acid （12）. Conclusion： The first three compounds are isolated from Chloranthus genus.
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关键词 ：银线草；金粟兰属；凝胶柱色谱；波谱解析；blumenol B
Key words： Chloranthus japonicus；Chloranthus genus；gel column chromatography；spectral analysis；blumenol B
中图分类号：R284.1 文献标识码：A文章编号：1006-4311（2015）25-0204-03
基金项目：河北省青年自然科学基金——银线草对左冠状动脉结扎大鼠心肌缺血保护的药效物质基础及作用机理的研究（项目编号：H2015209094）。
作者简介：陶思宇（1994-），男，天津人，学士学位，主要研究方向为天然药物化学；王晓霞（通讯作者）（1986-），女，山西大同人，讲师，博士，主要研究方向为天然药物化学。
0 引言
银线草（Chloranthus japonicus Sieb.）又名鬼督邮[1]，为金粟兰科植物银线草的全草或根及根茎。始载于《神农本草经》，别名有四叶金、四匹瓦等。主产于中国的黑龙江、辽宁、吉林、陕西等省，以根或者全草入药，具有很高的药用价值[1，2，3]。
除挥发油，目前银线草的化学成分研究主要集中萜类、木脂素类、酰胺类、黄酮类和皂苷等类型的化合物。萜类化合物是银线草中重要成分之一，尤其是倍半萜类化合物，另外香豆素和木脂素类化合物亦是银线草中最早报道的化学成分[4，5]。
为了更深入阐明银线草的药效物质基础，本实验对银线草95%乙醇提取物进行分离，共得到12个化合物。采用波谱学手段分别鉴定为：blumenol B（1），Vomifoliol （2），4-Hydroxy-2，3-dimethyl-2-nonen-4-olide（3），Atractylenolide III （4），Neolitacumone B（5），10α-hydroxy-1-oxoeremophila-7（11），8（9）-diene-8，12-olide （6），Shizukanolide C（7），Shizukanolide H（8），caffeic acid（9），p-hydroxy-coumaric acid（10），ferulic acid（11），protocatechuic acid（12）。其中化合物 （1-3） 为首次从该属分离得到。
1 仪器与材料
JASCO P-2000型旋光仪；JASCO V650型紫外光谱仪；Nicolet 5700型傅立叶变换红外光谱仪；Agilent 1100 Series LC/MS型质谱仪测定 ESI-MS；Agilent Technologies 6250 Accurate-Mass Q-TOF LC/MS型质谱仪；Inova 500M 核磁共振仪，溶剂峰为内标；Mercury-400核磁共振仪，溶剂峰为内标；SX-600 核磁共振仪，溶剂峰为内标；Agilent 1100 Series液相色谱仪；柱色谱硅胶（160-200目，200-300目），青岛海洋化工厂生产；硅胶GF254，青岛海洋化工厂生产；Sephadex TM LH-20，Amersham Pharmacia Biotech AB生产。
银线草经华北理工大学药学院中药教研室陈金铭鉴定为金粟兰科植物银线草（Chloranthus japonicus Sieb.）的全草。样品标本（No. 20110026）保存于华北理工大学药学院中药教研室。
2 提取与分离
干燥的银线草全草 10kg，粉碎，用 95% EtOH 80L浸泡2h后，加热回流提取4次，每次2小时，提取液减压浓缩，得到300g浸膏。将300g浸膏悬浮于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取。各提取液分别减压浓缩得石油醚部位80g，乙酸乙酯部位100g和甲醇部位120 g。取乙酸乙酯部位浸膏100g经硅胶（200～300目，500g） 柱色谱，CH2Cl2-MeOH （100：1→1：1）梯度洗脱，相同部分合并，得14个流份（Fr.1～Fr.14）。Fr.2（8.8g）再次进行硅胶（200～300目，100g）柱色谱，CH2Cl2 MeOH（30：1→10：1）梯度洗脱，得化合物1（30mg）、2（45mg）。Fr.3（6.5g）进行硅胶（200～300目，80g）柱色谱，CH2Cl2 MeOH（20：1→10：1）梯度洗脱，得化合物3～5粗品，再经SephadexLH-20柱色谱纯化（MeOH H2O1：1洗脱），得化合物3（23.2mg）、4（38mg）、5（16.3mg）。Fr.5（9.5g）进行ODS柱色谱，MeOH H2O（10：90→90：10）梯度洗脱得2个流份（Fr.5-1～Fr.5-2），Fr.5-1（110mg）再经半制备液相[MeOH H2O（30：70）]纯化得到化合物6（20mg）、7（35mg）、10（23mg）。Fr.5-2（80mg）再经半制备液相[MeOH H2O（40：60）]纯化得到化合物8（12mg）和9（26mg）。Fr.6（6.5g）进行ODS柱色谱，MeOH H2O（10：90→60：40）梯度洗脱得2个流份，Fr.6-1经SephadexLH-20柱色谱纯化（MeOH H2O1：2洗脱）得化合物11（20mg），Fr.6-2经重结晶（甲醇）的化合物12（50mg）。
3 结构鉴定
化合物1黄色油状；ESI-MSm/z249[M+Na]+，结合核磁共振数据推断该化合物分子式为C13H22O3；1HNMR（500MHz，CDCl3）δ：2.53（1H，d，J=16.0Hz，H-2a），2.23（1H，d，J=16.0Hz，H-2b），5.85（1H，s，H-4），1.88（2H，m，H-7），1.69（1H，m，H-8a），1.52（1H，m，H-8b），3.84（1H，m，H-9），1.23（3H，d，J=8.0Hz，H-10），2.04（3H，s，H-11），1.06（3H，s，H-12），1.10（3H，s，H-13）.13C NMR（125MHz，CDCl3）δ：41.8（C-1），50.1（C-2），198.3（C-3），125.9（C-4），168.4（C-5），77.8（C-6），33.5（C-7），33.3（C-8），68.6（C-9），23.7（C-10），21.2（C-11），23.9（C-12），23.9（C-13）。以上数据与文献报道此化合物的数据[6]一致，故鉴定该化合物为blumenolB。
化合物2黄色油状；ESI-MSm/z：247[M+Na]+，结合核磁共振数据推断该化合物分子式为C13H20O3；1HNMR（500MHz，CDCl3）δ：2.46（1H，d，J=16.0Hz，H-2a），2.26（1H，d，J=15.0Hz，H-2b），5.92（1H，s，H-4），5.90（1H，d，J=12.0Hz，H-7），5.88（1H，dd，J=16.0，4.0Hz，H-8），4.42（1H，m，H-9），1.32（3H，d，J=4.0，H-10），1.11（3H，s，H-11），1.01（3H，s，H-12），1.91（3H，s，H-13）.13C NMR（125MHz，CDCl3）δ：41.2（C-1），49.8（C-2），197.9（C-3），126.9（C-4），169.1（C-5），79.1（C-6），135.8（C-7），128.9（C-8），68.1（C-9），22.9（C-10），23.9（C-11），24.1（C-12），18.9（C-13）。以上数据与文献报道此化合物的数据一致，故鉴定该化合物为Vomifoliol。
化合物3黄色油状；ESI-MSm/z：221[M+Na]+，结合核磁共振数据推断该化合物分子式为C11H18O3；1HNMR（500MHzCD3OD）δ：1.93（3H，d，J=0.8Hz，CH3-2），1.79（3H，d，J=0.8Hz，CH3-3），1.19（1H，m，H-6a），0.97（1H，m，H-6b），1.29（4H，m，H-7，8），0.89（3H，t，J=6.9Hz，H-9）.13C NMR（125MHzCD3OD）δ：174.9（C-1），160.8（C-2），126.1（C-3），109.6（C-4），37.3（C-5），24.2（C-6），33.2（C-7），23.9（C-8），14.6（C-9），11.2（CH3-2），8.6（CH3-3）。以上数据与文献报道此化合物的数据一致，故鉴定该化合物为4-Hydroxy-2，3-dimethyl-2-nonen-4-olide。
化合物4白色无定形粉末；ESI-MSm/z263[M+H]+，285[M+Na]+，261[M+H]+，提示其分子量为262。结合核磁共振数据推断该化合物分子式为C15H20O3；1HNMR（500MHz，CDCl3）δ：2.27（1H，m，H-1α），1.98（1H，m，H-1β），1.65（2H，m，H-2），2.39（1H，m，H-3α），1.59（1H，m，H-3β），1.55（1H，m，H-5），2.44（1H，d，J=13.1Hz，H-6a），2.61（1H，dd，J=13.1，3.8Hz，H-6b），5.37（1H，s，H-9），1.79（3H，s，CH3-13），0.99（3H，s，CH3-14），4.81（1H，br.s，H-15α），4.56（1H，br.s，H-15β）；13C NMR（125MHz，CDCl3）δ：41.3（C-1），22.3（C-2），36.1（C-3），148.7（C-4），51.8（C-5），24.7（C-6），161.6（C-7），104.1（C-8），51.1（C-9），36.8（C-10），122.4（C-11），173.1（C-12），8.1（C-13），16.4（C-14），106.6（C-15）。将化合物4的1HNMR，13CNMR的数据与atractylenolideIII的数据相比较，发现两者基本一致，因此该化合物的结构被鉴定为atractylenolideIII。
化合物5白色无定形粉末；ESI-MSm/z263[M+H]+，285[M+Na]+，提示其分子量为262。结合核磁共振数据鉴定该化合物为neolitacumoneB，此结论与文献报道此化合物的数据吻合。
化合物6白色无定形粉末；ESI-MSm/z263[M+H]+，提示其分子量为262。结合核磁共振数据推断该化合物为10α-hydroxy-1-oxoeremophila-7（11），8（9）-diene-8，12-olide，此结论与文献报道此化合物的数据吻合。
化合物7白色无定形粉末；ESI-MSm/z279[M+Na]+，提示其分子量为246。结合核磁共振数据推断该化合物为shizukanolideC，此结论与文献报道此化合物的数据吻合。
化合物8白色无定形粉末；结合核磁共振数据推断该化合物为shizukanolideH，此结论与文献报道此化合物的数据吻合。
化合物9淡黄色粉末，FeCl3反应显阳性，溴酚蓝反应阳性。结合核磁共振数据推断该化合物为咖啡酸，此结论与文献报道此化合物的数据吻合。
化合物10淡黄色粉末，FeCl3反应显阳性，溴酚蓝反应阳性。ESI-MSm/z：162.7[MH]-。结合核磁共振数据推断该化合物为对羟基桂皮酸，此结论与文献报道此化合物的数据吻合。
化合物11白色粉末，FeCl3反应显阳性，溴酚蓝反应阳性。结合核磁共振数据鉴定该化合物为阿魏酸，此结论与文献报道此化合物的数据吻合。
化合物12白色针状结晶，三氯化铁-铁氰化钾反应阳性，溴甲酚绿反应阳性。结合核磁共振数据推断该化合物为原儿茶酸，此结论与文献报道此化合物的数据吻合。
4 讨论
金粟兰属作为我国分布较全并存在特有种的属，目前其研究与开发尚不深入，因此对金粟兰属植物开展系统而深入的研究和开发，具有重要的科学价值和实际意义以及非常广阔的应用前景。本文对金粟兰科植物银线草的化学成分进行了研究，化合物1-3为首次从该属植物中分离得到为银线草化学成分的深入研究提供有益参考。
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参考文献：
[1]刘佳宝，张瑛，崔保松，等.宽苞水柏枝化学成分研究[J].中草药，2013，44（19）：2661-2665.
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